无内毒素质粒小提试剂盒

一、产品简介

GOONIE 400-201 无内毒素质粒小提试剂盒，采用改良碱裂解法结合柱式硅胶膜技术，配合改良除内毒素液，从 1~5 mL 过夜培养菌液中提取高质量质粒 DNA。内毒素残留极低（＜0.1 EU/μg），可直接用于细胞转染、动物注射、酶切、PCR、测序等下游实验。操作简便快捷，35 min 内即可完成质粒提取。50 次反应装量。

 

二、产品规格总表

参数	详情
产品名称	无内毒素质粒小提试剂盒（Endotoxin-Free Plasmid Mini Prep Kit）
货号	400-201
品牌	GOONIE / 信天翁生物
规格	50 次反应（50T）
提取原理	碱裂解法 + 硅胶膜柱式纯化 + 改良除内毒素液
菌液用量	1~5 mL 过夜培养
内毒素残留	＜0.1 EU/μg
下游应用	细胞转染、动物注射、酶切、PCR、测序
操作时间	约 35 min
吸附柱型号	GA6
储存条件	室温保存 18 个月；RNase A 室温运输和保存，长期（＞3 个月）需 -20~8℃；加入 P1 后，P1 需 2~8℃ 保存，有效期 6 个月

 

三、产品组成

组分	装量 / 50T	货号
溶液 P1	11 mL	400-201A
溶液 P2	11 mL	400-201B
溶液 P3	11 mL	400-201C
除内毒素液	29 mL	400-201D
洗涤液 1	28 mL	400-201E
洗涤液 2	15 mL（需加 60 mL 无水乙醇）	400-201F
RNase A	110 μL	400-201G
洗脱缓冲液	10 mL	400-201H
GA6 吸附柱（含收集管）	50 个	400-201I

 

四、实验前准备

1. 首次使用前，将 RNase A 全部加入至溶液 P1 中，混匀后做上标记。
2. 首次使用前，向洗涤液 2 中加入 60 mL 无水乙醇，混匀后做上标记。
3. 准备 1.5/2 mL 离心管、无水乙醇。

 

五、操作步骤

Step 1 · 收集菌体
按需取 1~5 mL 过夜培养菌液于 2 mL 离心管中，13000×g 离心 1 min 收集菌体（菌液较多时可多次离心合并至同一管）。吸弃上清，液体弃尽。

Step 2 · 重悬菌体
加入 200 μL 溶液 P1（已含 RNase A），涡旋直至菌体完全重悬。
注意：菌体须完全重悬分散，否则影响后续碱裂解效率及产量。

Step 3 · 碱裂解
加入 200 μL 溶液 P2，温和地上下颠倒 8 次，室温静置 3 min（不超过 5 min）。
注意：切勿剧烈震荡，避免基因组 DNA 断裂残留。裂解时间不超过 5 min，防止质粒受损。此时菌液应变为清亮黏稠；若仍未清亮，可能是菌体过多、裂解不彻底，应减少菌量。

Step 4 · 中和沉淀
加入 200 μL 溶液 P3，立即上下颠倒 15 次，此时应出现白色絮状沉淀。13000×g 离心 10 min。
注意：P3 加入后须立即混匀，避免局部沉淀。

Step 5 · 除内毒素
将上清液（约 550 μL）转移至新的 2 mL 离心管中，加入等体积除内毒素液，混匀。

Step 6 · 上柱结合
将步骤 5 的混合液转移至 GA6 吸附柱（已放入收集管）中，13000×g 离心 30 sec，弃滤液。
注意：吸附柱最大承载容积 750 μL，若混合液超过该体积，需分次上柱。

Step 7 · 重复上柱
重复步骤 6，直至全部混合液上柱完毕。

Step 8 · 洗涤液 1 洗涤
加入 500 μL 洗涤液 1 至吸附柱中，室温静置 30 sec，13000×g 离心 30 sec，弃滤液。

Step 9 · 洗涤液 2 洗涤
加入 700 μL 洗涤液 2（已加 60 mL 无水乙醇）至吸附柱中，室温静置 30 sec，13000×g 离心 30 sec，弃滤液。

Step 10 · 重复洗涤液 2
重复步骤 9 一次。

Step 11 · 干柱离心
将吸附柱放回收集管中，13000×g 离心 2 min，甩干残留液体。

Step 12 · 洗脱质粒
将吸附柱放入新的 1.5 mL 离心管中，加入 30~100 μL ddH₂O 至吸附柱膜中央，室温静置 2 min，13000×g 离心 1 min，弃吸附柱。

Step 13 · 保存
提取的质粒 DNA 于 -20℃ 保存。

 

六、注意事项

1. 溶液 P2 在低温时可能有沉淀析出，若有沉淀，置于 37℃ 复溶至澄清后使用。
2. 各组分使用后应及时盖紧，避免醇挥发或 pH 变化。
3. 本产品仅用于科研，不可用于诊断。

 

七、常见问题（FAQ）

 

问题	解答
提取的质粒内毒素含量是多少？	＜0.1 EU/μg，可直接用于转染、动物注射等对内毒素敏感的实验。
本试剂盒一次能提取多少质粒？	50 次反应装量，每次可处理 1~5 mL 过夜菌液。
小提试剂盒和大提（400-204）有什么区别？	400-201 适用于 1~5 mL 菌液，操作快（约 35 min），适合快速筛选和小量制备；400-204 适用于 100~200 mL 菌液，适合大量制备高纯度质粒。
可用于哺乳动物细胞转染吗？	可以。内毒素含量极低，适合 HEK293、CHO 等常见细胞系的转染实验。
可用于动物体内注射吗？	可以。产品专为去除内毒素设计，提取的质粒可用于小鼠等动物模型注射。
洗涤液 2 需要额外加乙醇吗？	是的，首次使用前需向 15 mL 洗涤液 2 中加入 60 mL 无水乙醇，混匀后使用。
RNase A 加入 P1 后能保存多久？	加入后混匀，溶液 P1 需 2~8℃ 保存，有效期 6 个月。
溶液 P2 出现沉淀怎么办？	溶液 P2 低温时可能有沉淀析出，置于 37℃ 复溶至澄清即可正常使用，不影响提取效果。
质粒产量偏低怎么办？	检查：① 菌体是否完全重悬；② P2 裂解是否充分（溶液应变清亮黏稠）；③ P3 中和是否立即混匀；④ 菌液是否为对数后期（OD600 ≈ 2~4）。可尝试增加菌量至 5 mL。

 

八、相关产品信息

相关产品	说明
400-204 无内毒素质粒大提试剂盒	适用于 100~200 mL 菌液的大规模质粒制备，10T 装量
120-6001 质粒小提试剂盒	常规质粒小提（非无内毒素版本），适合仅需酶切/PCR 等常规应用