信天翁GOONIE 通用型植物总RNA 提取试剂盒（多糖多

产品简介

信天翁生物通用型植物总RNA提取试剂盒（货号：400-108）适用于从不同植物组织中快速提取总RNA。本试剂盒可进行各种简单植物组织（如水稻、小麦、玉米、拟南芥、本生烟等植物幼嫩组织）的RNA提取，同时也可进行多糖多酚类植物样本RNA的提取。提取过程中无需使用酚氯仿、β-巯基乙醇和DTT等有毒试剂，也无需耗时的醇类沉淀，整个提取过程约需17分钟。

试剂盒提供两种不同裂解液，适用更广泛的植物样本类型。整合DNase I柱上消化步骤，有效去除样本gDNA，RNA结合柱高效结合RNA，配合优化Buffer体系，可获得高纯度总RNA。RNA产物可用于RT-PCR、荧光定量PCR、RNA建库、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot和分子克隆等多种下游实验。

产品保存

产品特点

裂解液选择指南

由于植物次生代谢产物种类多样，植物样本类型复杂，单种裂解液通常无法覆盖不同的植物样本，故试剂盒提供了两种不同裂解液。Lysis Buffer A针对的样本类型更加广泛，但在遇到高淀粉含量的植物样本时会生成胶状物质妨碍提取，在一些高多糖样本中也可能与多糖共沉淀导致提取失败。Lysis Buffer B通常能正常提取高淀粉含量的植物样本，但在简单植物样本中提取产量可能偏低。在明确不是高淀粉类、高多糖类样本情况下，建议优先尝试用Lysis Buffer A进行提取，或用两种Buffer先进行一次预实验确定合适的Buffer。

操作流程

1. 样本处理

称取50-100 mg植物组织，加入液氮后用研钵磨成粉末，或液氮速冻后用冷冻研磨仪快速将样品研磨成粉末。研磨应尽可能充分快速，并保证低温，以防止RNA降解。

2. 样本裂解

迅速向研磨好的植物样品粉末中加入600 μL的Lysis Buffer A或Lysis Buffer B（根据样本选择一种裂解液，若不确定，可先用两种裂解液都进行测试，然后再选择合适的），剧烈涡旋振荡30秒，使样本与裂解液充分混合均匀，然后13,000 × g室温离心5 min。

3. RNA结合

弃去沉淀，将上一步离心后的上清转入一个新的干净的离心管（部分样品上层会有漂浮的固体类或油脂类杂质，则吸取中间层澄清液体），并加入0.5倍上清体积的无水乙醇，用移液器吹打6-8次混匀，然后将混合液转入RNA结合柱（结合柱先套入收集管中），13,000 × g室温离心30秒。

4. 柱清洗

（1）弃滤液，向RNA结合柱（含收集管）中加入750 μL的CB Buffer（首次使用前需加入对应量无水乙醇），13,000 × g室温离心30秒。

（2）弃滤液，向RNA结合柱（含收集管）中加入500 μL的Wash Buffer（首次使用前需加入对应量无水乙醇），13,000 × g室温离心30秒。

5. gDNA消化

弃滤液，按下表比例配制DNase I反应液。

将配好的DNase I反应液加98 μL到RNA纯化柱膜中央，室温放置5分钟（切勿离心，必须按照下一步加入CB Buffer以后才能离心）。此用量和反应时间通常能够去除大部分gDNA，如对gDNA去除要求特别高，可延长反应时间至10分钟。若实验对gDNA残留不敏感，可直接跳过此步骤。

6. 二轮柱清洗

（1）向RNA结合柱（含收集管）中加入750 μL的CB Buffer（首次使用前需加入对应量无水乙醇），13,000 × g室温离心30秒。

（2）弃滤液，向RNA结合柱（含收集管）中加入500 μL的Wash Buffer（首次使用前需加入对应量无水乙醇），13,000 × g室温离心30秒。

7. 空管离心

弃滤液，将RNA结合柱放回收集管，13,000 × g室温空管离心30秒。

8. RNA洗脱

弃收集管，将RNA结合柱转入新的1.5 mL RNase-free离心管中，向RNA纯化柱柱膜中央悬空滴加30-100 μL的Elution Buffer，室温放置2分钟，13,000 × g室温离心1分钟。弃纯化柱，1.5 mL离心管中产物即为RNA产物，立即进行下游实验或置于-80°C保存。

提取效果

以下为部分代表性植物样本的提取数据。

普通植物根茎及叶片：

多糖多酚植物：

【水稻叶、辣椒叶、番茄叶、小麦叶、茄子叶、扁豆叶、本生烟叶RNA电泳图】

常见问题

可以。Lysis Buffer受温度变化的影响可能会因结晶析出而变浑浊，属于正常现象。使用前将瓶置于55°C温水孵育，偶尔摇动，直至溶液完全恢复澄清透明即可正常使用，不影响提取效果。

若样本为常规幼嫩组织（水稻、拟南芥、烟草等）或多酚类样本（花瓣、茶树叶等），优先选择Lysis Buffer A。若为高淀粉含量样本（土豆、红薯、板栗）或复杂多酚类样本（松针、棉花叶片），则建议使用Lysis Buffer B。对于不确定类型的样本，可分别用两种裂解液进行小量预实验，根据提取效果确定方案。

如果下游实验对基因组DNA残留不敏感，可以跳过此步骤以缩短操作时间。但对于荧光定量PCR、RNA建库等高灵敏度实验，强烈建议执行DNase I柱上消化，标准消化5分钟即可去除大部分gDNA，若对残留要求极高可延长至10分钟。

推荐用量为30-100 μL。若预期RNA产率较低，建议使用30-50 μL以获得较高浓度的RNA产物；若样本RNA丰度高，可适当增加洗脱体积以提高回收率。需注意，减少洗脱体积会相应降低洗脱效率，建议根据样本类型和实验需求进行优化。

建议洗脱后立即进行下游实验。如需保存，可置于-80°C冰箱冻存。应避免反复冻融，以免造成RNA降解。首次使用Elution Buffer前，建议在超净工作台中小份分装，防止多次取用引入RNase污染。

对于珍稀样本或首次尝试的复杂样本，强烈建议先用少量样本进行预实验，确认提取效果（包括产率、纯度和完整性）后再放大到正式实验用量。这样可以避免珍贵样本的浪费。

页面总结

信天翁生物通用型植物总RNA提取试剂盒（400-108）提供双裂解液体系，适配从普通植物组织到多糖多酚、高淀粉等复杂样本的广泛植物类型。柱上DNase I消化有效去除gDNA污染，全程无需酚氯仿等有毒试剂，17分钟完成提取，RNA产物可直接用于RT-PCR、荧光定量PCR、RNA建库等多种下游实验。