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Caspase-3 生化检测

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  • Caspase-3 生化检测
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  • 2026年07月10日
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      上海经科化学科技有限公司

    • 服务名称

      Caspase-3 生化检测实验服务

    • 规格

    Caspase-3 手动生化检测实验服务说明

    一、服务项目概述

    本项目属于手动生化检测体系,仅可用于科研实验,不可用于人体临床诊断。配套可同步开展检测指标包含:总超氧化物歧化酶 T-SOD、丙二醛(吸光度法 / 荧光强度法)、谷胱甘肽过氧化物酶 GSH-PX、过氧化氢酶 CAT、一氧化氮 NO、NOS、还原型谷胱甘肽 GSH、总谷胱甘肽 / 氧化型谷胱甘肽 T-GSH/G-S-SG、总抗氧化能力 T-AOC、游离脂肪酸 NEFA、总铁 Fe、亚铁 Fe²⁺、羟脯氨酸 HYP、乳酸 Lactate、碱性磷酸酶 ALP、三磷酸腺苷 ATP、酸性磷酸酶 ACP、肝 / 肌糖原 Glycogen、植物可溶性糖 SS、活性氧 ROS、Caspase-1、Caspase-8、Caspase-9、尿蛋白 UP、游离血红蛋白 FHb。

    指标科研意义

    Caspase 全称为半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶,是调控细胞凋亡的关键蛋白家族。Caspase-3 又称 CPP32、Yama、apopain,归属于 CED-3 亚家族,是哺乳动物细胞中研究最广泛的凋亡执行酶。正常细胞内 Caspase-3 以无活性酶原形式存在于胞浆;细胞凋亡发生时该酶被激活,活化后由大小两种亚基构成,可裂解胞浆、胞核底物,最终介导细胞凋亡,适用于细胞凋亡通路、凋亡机制相关科研。

    检测设备

    全波长酶标仪

    酶活定义与计算参数

    1. 酶活定义:底物饱和、37℃条件下,1 小时内剪切底物产生 1nmol pNA 所需的 Caspase-3 量为 1 个酶活力单位。
    2. 活力计算公式:Caspase-3 活性 (U/ng prot)= 标准换算浓度 × 反应总体积 ÷ 样本体积 ÷ 蛋白浓度 ÷ 反应时长 ×10³
       
      配套参数:反应总体积 0.1mL,样本添加体积 0.045mL,反应时长 2h,10³ 为摩尔换算系数;标准曲线公式 y=424.63x+0.7546,R²=0.9994。

    二、样本用量与匀浆说明

    1. 适用样本:动物组织、细胞沉淀,无液体样本;组织最低用量 15mg;
    2. 匀浆要求:采用专用试剂单独匀浆,Caspase 家族指标可共用一套匀浆体系。

    三、各类样本取材、保存、干冰运输规范

    全部样本统一干冰运输,全程避免反复冻融。

    1. 动物组织样本

    动物处死后 5min 内冰上取样,优先取胰腺、肠、胃等易降解组织,单块组织重量≥50mg;心、肝、脾、肾多血组织用预冷 PBS 多次漂洗、滤纸吸干后分装冻存管 - 80℃;肠胃、血管、子宫剪开清除内容物再清洗;斑马鱼样本总量达到黄豆大小;小鼠至少 4 个视网膜、大鼠至少 2 个视网膜合并检测;皮肤样本彻底去除毛发。

    2. 细胞样本

    细胞总量不少于 10⁷,细胞沉淀达到黄豆大小,禁止寄送培养板、培养瓶;
     
    贴壁细胞:PBS 清洗后单向轻柔刮取,4℃≤3000rpm 离心 5min 收集沉淀;
     
    悬浮细胞:连同培养基离心,PBS 重悬后二次离心收集足量细胞沉淀。

    四、标准化完整实验流程

    1. 样本接收核验:核对样本类型、重量、外观、储存运输条件;
    2. 检测前处理:专用试剂制备组织 / 细胞匀浆,按需配制全套检测试剂;
    3. 上机检测:依次加样、完成显色反应,酶标仪读取空白、标准品、各组样本 OD 值;
    4. 数据换算:代入标准曲线与酶活公式计算 Caspase-3 活力;
    5. 结果交付:原始 OD 读数、蛋白浓度、酶活力汇总为 Excel 表格输出,活力单位 U/ng prot。

    五、全套指标匀浆分类说明

    1. 通用试剂匀浆指标:MDA、T-SOD、GSH-PX、CAT、T-AOC、NO、ALP、ACP、Lactate、NEFA;
    2. 专用试剂单独匀浆指标:Caspase 家族(1/3/8/9 共用)、T-GSH/G-S-SG、ROS、ATP、肝肌糖原、植物可溶性糖、总铁 / 亚铁、HYP。

    六、服务交付内容

    1. 标准化生化实验送样单;
    2. 完整检测数据表:包含样本编号、OD 值、蛋白浓度、Caspase-3 酶活力;
    3. 样本取材、匀浆、酶活计算全套操作说明文件;
    4. 标准化完整实验操作流程记录。

    七、重要使用提示

    本 Caspase-3 检测及全套手动生化检测服务仅面向院校、科研院所、生物医药研发单位开展基础科研使用,所有吸光度原始数据、酶活力检测报告仅作科研参考,不能作为人体临床疾病诊断依据。

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