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- 2026年07月06日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
探针设计合成-2OD（一端标记、DIG）
- 规格：
张
一、服务简介
服务原理
二、完整标准合成流程
- 探针序列设计：完成特异性探针序列设计。
- 固相合成：采用固相亚磷酰胺三酯法，循环开展脱保护、耦连、加帽、氧化四步反应，逐个将核苷酸单体连接至 3’固相载体，同步完成位点标记修饰。
- 氨解处理：将合成完成的寡聚核苷酸从 CPG 固体载体化学切割，氨解去除全部保护基团。
- HPLC 纯化：粗品经初检合格后，通过高效液相色谱依据分离差异去除杂质，制备纯化目标产物。
- 质谱质检：使用 LTQ-MS 质谱仪对纯化产物开展纯度检测。
- 定量分装干燥：酶标仪检测 A260 完成定量分装，真空干燥制为干粉样品。
三、标记规格可选范围
- 一端标记：DIG、FAM、CY3、CY5，分 2OD、4OD 规格；
- 两端标记：DIG、FAM、CY3、CY5，分 2OD、4OD 规格。
四、样本运输储存要求
- 干粉形态探针：4℃条件保存运输；
- 液体形态探针：-20℃条件保存运输。
五、交付成果
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文献和实验I采用了显色法，使用显色底物 NBT/BCIP；而Starter Kit II选用化学发光法底物CSPD。 如果您用来合成探针的DNA模板的量比较少或是质量不够高的时候，建议您使用PCR DIG Probe Synthesis Kit。该试剂盒专用于制备高灵敏度的杂交探针，例如单拷贝的基因。其另一个特点就是实验中无需定量斑点检测过程，通过定量凝胶电泳就可以快速确定PCR标记探针的效率。
问：本人想合成一端核苷酸，我需要很大的量，但我不知到是不是公司给我合成后，拿回来我自己再扩增，还是公司直接合成我所需要的量？ 答：首先的是要明确你合成这段核苷酸的用途。如果是单链引物，用2OD也即是公司合成的量就足够了。是双链则另当别论。
与探针设计策略。 先对各个亚群设计各自保守的引物与探针，然后探针用同一染料标记，这样在实时PCR反应中，虽然是多重PCR反应，但报告却是同一个染料报告。 8. 基康公司有多种染料探针合成，可满足ABI7700荧光定量PCR仪多重PCR检测标准。 采用荧光标记探针检测产物的特异性比较强，TaqMan探针是荧光定量PCR中常用的荧光探针，一般TaqMan探针5′端的荧光标记基团是FAM、VIC等，TaqMan探针3′端荧光标记集团为TAMRA、Quencher等
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