TUNEL+IF 双标扫描 联合免疫荧光双标记切片染色成像分

一、服务简介

基础检测原理

1. TUNEL 凋亡检测：荧光标记 dUTP 在末端转移酶催化下，结合凋亡细胞断裂 DNA 的 3’-OH 位点，通过荧光信号直观标记凋亡细胞。
2. 传统实验矛盾：免疫荧光检测需要高温抗原修复暴露抗原，高温会造成 DNA 大量断裂，造成 TUNEL 假阳性；若先完成 TUNEL 再做蛋白染色，TUNEL 荧光会在后续流程发生淬灭，无法同时保证两项检测结果可靠。
3. 方案解决思路：将 TUNEL 凋亡标记、两种靶蛋白 IF 标记分独立轮次开展，每轮单独扫描留存最佳荧光图像，最后通过软件高精度融合全部通道，规避荧光淬灭、串色、假阳性问题；配套 TSA 酪胺信号放大技术，提升检测灵敏度，同源、异源一抗均可适用。

二、服务核心优势

1. 同一张切片兼容凋亡标记 + 两种蛋白荧光信号，彻底解决多荧光互相干扰、染料过多串色、信号淬灭难题；搭配 TSA 信号放大体系，阳性信号检出灵敏度更高，无抗体种属限制；
2. 高分辨率全景成像，以 DAPI 信号为参照，采用 0.5 像素高精度重合算法匹配每一轮扫描画面，融合图像组织对位精准；
3. 配套轻量化图像分析软件，普通办公电脑即可打开全景文件，一键输出共定位细胞数量、阳性比率、细胞密度等量化参数，无需高端服务器硬件。

三、完整标准实验流程

1. 样本准备
2. 蛋白酶 K 消化处理
3. 凋亡细胞 TUNEL 荧光标记
4. DAPI 细胞核复染，完成封片
5. 切片高清全景扫描，留存 TUNEL 通道原始图像
6. 专用荧光淬灭设备清除切片 TUNEL 荧光基团
7. 高温抗原修复
8. 内源性过氧化物酶封闭
9. 血清封闭
10. 第一种一抗孵育
11. HRP 标记二抗孵育
12. iF488-TSA 荧光标记
13. 抗体洗脱液洗脱本轮一抗、二抗
14. 再次血清封闭，开展第二轮蛋白标记
15. DAPI 复染细胞核并封片
16. 第二轮全景扫描，留存第二组 IF 荧光图像
17. 拆除盖玻片，使用抗体洗脱液清洗切片
18. 荧光去除设备清除本轮所有荧光基团
19. 全部轮次实验结束后，软件完成所有扫描图像高精度融合处理

四、样本适配与送样规范

1. 石蜡切片常温保存运输；冰冻切片 - 20℃保存运输；
2. 细胞爬片、细胞滴片、细胞涂片不适用本方案：拆盖玻片易造成细胞脱落，多轮扫描无法保证视野完全重合，图像无法正常融合；
3. 实验全程切片组织形态结构不能发生改变，否则多轮图像无法匹配融合。

五、交付成果