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- 2026年05月26日
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本服务项目主要是根据客户的要求制备兔单克隆抗体，兔单抗具有高特异性、强亲和力的优点。兔因其免疫系统发育的特殊性，能有效识别在小鼠中免疫原性低的抗原或半抗原。因此，与鼠单抗相比，兔单抗在科研、诊断和医疗多个领域有着更好的表现与广泛的应用，且有更高的亲和力和特异性，可识别更多抗原表位，有更多的候选阳性克隆，更易于人源化特点。
单B细胞抗体开发技术是通过流式分选技术，从免疫动物或康复者外周血中分离抗原特异性B细胞，利用单细胞测序技术从单一B细胞中提取抗体重、轻链基因，并将抗体基因序列插入高表达载体，从而实现抗体的高效开发与表达。该技术获得抗体重、轻链基因天然配对、易于改造，抗体亲和力高。相比传统方法（如杂交瘤技术），单B细胞抗体技术显著缩短了开发周期；能够以较少的细胞量获得更多的特异性单克隆抗体，且阳性克隆数量显著高于传统方法。
噬菌体展示技术(Phage Display)是采用分子克隆技术从脾脏或外周血PMBC中提取抗体重、轻链基因，通过基因工程技术将抗体的重、轻链基因克隆至噬菌粒载体，将抗体基因与噬菌体外壳蛋白（如pIII）融合表达，使抗体展示在噬菌体表面，构建噬菌体文库，然后通过加压筛选获得高亲和力的阳性克隆。噬菌体文库包括包括天然抗体库、免疫抗体库、人工改造的库等，相比传统抗体开发技术，噬菌体展示技术可以针对各种抗原的抗体，包括蛋白质、多肽、细胞表面抗原等筛选和富集数百万个不同的抗体，极大地提高了筛选效率，并且保留了样本中抗体种类的多样性。噬菌体展示技术是一种高效、快速的抗体开发技术，具有高通量、高多样性和易于操作的特点。通过直接展示抗体蛋白在噬菌体表面，该技术能够快速筛选出高特异性和高亲和力的抗体，广泛应用于治疗性抗体开发、诊断试剂制备和基础研究等领域。
一、 服务流程
1、客户提交重组兔单克隆抗体制备请求并明确对抗体的要求，与公司商定具体的制备项目、数量和费用，双方签订《委托单克隆抗体制备合同》。
2、客户提供抗原或抗原信息，我公司按照合同要求安排重组兔单克隆抗体制备服务，并在规定时间内完成制备委托。
3、抗体制备完成后，我公司按照客户要求纯化分装，免费低温邮寄给客户，同时提供抗体制备报告。
二、 样品要求
1、客户提供制备抗体所需蛋白或多肽片段，抗原纯度＞85%，数量＞10mg，浓度＞1mg/ml。
2、客户提供的抗原信息应包含蛋白抗原的英文全称、种属信息、GeneID或序列信息；化合物抗原应提供化学结构式、活性基团、溶解性等信息。
3、请提前说明样品来源和生物危害等情况，或其他任何特殊情况。
三、兔单克隆抗体收费标准
1、单B细胞平台
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服务项目 |
服务内容 |
周期 |
收费 |
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抗原制备 |
a.甲方提供xxx蛋白抗原，或多肽偶联蛋白10mg（抗原无毒性），乙方用于免疫动物和检测 |
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b. 客户提供多肽，博奥森偶联载体蛋白 |
1周 |
询价 |
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c. 原核系统表达蛋白 |
4周 |
询价 |
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d. 设计、合成多肽、偶联载体蛋白（15aa左右） |
2周 |
询价 |
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e. 磷酸化、甲基化修饰多肽、偶联载体蛋白（包括：设计修饰多肽两条，分别合成及偶联，未修饰多肽一条） |
2周 |
询价 |
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f. 特殊修饰多肽 |
4周 |
询价 |
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动物免疫 血清检测 |
免疫2只新西兰大白兔，免疫3-4次，血清效价采用间接ELISA法，最终取一只达到效价>1:16000以上，可满足单细胞分选
注：甲、乙双方根据检测结果最终判定是否项目需要继续进行（结果要及时反馈）；甲方自行选择是否进行内源性验证 |
4-6周 |
询价 |
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B细胞分选与培养 |
选出免疫应答最佳的1只兔子，从脾脏或全血中分离PBMC，采用IgG阳性和抗原特异性双阳性通过流式细胞术（FACS）分选记忆性单B细胞至10个96孔细胞培养板培养 |
2周 |
询价 |
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阳性克隆对筛选及B细胞的测序 |
对经培养的B细胞克隆进行抗原ELISA筛选，阳性B细胞上清供甲方进行测试，选取10株单克隆进行单B细胞测序，获取抗体轻重链基因序列。
注：甲方自行选择是否进行内源性验证 |
1-2周 |
询价 |
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阳性克隆抗体的重组表达 |
将扩增得到的抗体基因插入带有恒定区基因的表达载体中，然后选择合适的表达系统进行表达，然后采用Protein A亲和纯化，最终每个兔单抗交付不超过50ug |
4周 |
询价 |
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抗体的扩大培养与纯化 |
根据客户选定的2-3株克隆，进行扩大培养，并通过亲和层析等纯化方法提纯抗体
注：甲方自行选择是否进行内源性验证 |
2周 |
询价 |
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产品交付 |
1、2-3个兔单克隆抗体100ug 2、2-3个挑选的兔单抗对应的抗体序列 3、项目报告 |
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2、 噬菌体展示平台
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服务项目 |
服务内容 |
周期 |
收费 |
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抗原制备 |
a.甲方提供xxx蛋白抗原，或多肽偶联蛋白10mg（抗原无毒性），乙方用于免疫动物和检测 |
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b. 客户提供多肽，博奥森偶联载体蛋白 |
1周 |
询价 |
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c. 原核系统表达蛋白 |
4周 |
询价 |
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d. 设计、合成多肽、偶联载体蛋白（15aa左右） |
2周 |
询价 |
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e. 磷酸化、甲基化修饰多肽、偶联载体蛋白（包括：设计修饰多肽两条，分别合成及偶联，未修饰多肽一条） |
2周 |
询价 |
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f. 特殊修饰多肽 |
4周 |
询价 |
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动物免疫 血清检测 |
免疫2只新西兰大白兔，免疫3-4次，血清效价采用间接ELISA法，最终取一只达到效价>1:16000以上，可满足继续实验； 注：甲、乙双方根据检测结果最终判定是否项目需要继续进行（结果要及时反馈） |
8-10周 |
询价 |
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B细胞收集 |
采集外周血，分离PBMC或取脾脏组织，提取总RNA，采用RT-PCR制备cDNA |
1周 |
询价 |
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噬菌粒的构建与转化 |
1、噬粒构建与转化：以cDNA为模板、PCR扩增兔轻、重链可变区基因，兔VH、VL基因拼接噬菌粒载体，电击转化TG1宿主菌，构建噬菌体文库 2、文库鉴定：随机挑选24个克隆，PCR鉴定阳性率 3、文库phage制备：文库培养扩增+辅助噬菌体侵染包装，表达成phage库 |
4-5周 |
询价 |
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噬菌体文库筛选 |
1、采用固相筛选等多种方式，进行亲和筛选，筛选高亲和力兔单抗 2、挑取96个克隆培养扩增+IPTG诱导表达+ELISA检测阳性克隆 3、挑取全部阳性克隆进行基因测序 |
4-5周 |
询价 |
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表达抗体（备选） |
选择真核表达系统进行表达 |
2-4周 |
询价 |
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抗体鉴定（备选） |
对纯化后的抗体进行最终鉴定，ELISA、WB、SPR等 |
1周 |
询价 |
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产品交付 |
1、实验报告，包括流程，检测报告 2、阳性克隆序列 3、阳性菌株 4、噬菌体免疫文库 |
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文献和实验抗体的检测外，还应该用与其抗原成分相关的其它抗原进行交叉试验，方法可用ELISA、IFA法。例如：①制备抗黑色素瘤细胞的McAb，除用黑色素瘤细胞反应外，还应该用其它脏器的肿瘤细胞和正常细胞进行交叉反应，以便挑选肿瘤特异性或肿瘤相关抗原的单克隆抗体。②制备抗重组的细胞因子的单克隆抗体，应首先考虑是否与表达菌株的蛋白有交叉反应，其次是与其它细胞因子间有无交叉。 2．McAb的Ig类与亚类的鉴定 一般在用酶标或荧光素标记的第二抗体进行筛选时已经基本上确定了抗体的Ig类型
1. 杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。2. 单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。
一、实验目的： 单克隆抗体制备是细胞免疫学的一个重要里程碑，它涵盖了细胞培养、细胞融合、免疫动物和抗体效价检测等各个方面内容。了解单克隆抗体制备的原理、主要步骤和方法。 二、实验原理： 骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖，但不能分泌特异性抗体；而抗原免疫的B淋巴细胞能产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖。将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞，继承了两个亲代细胞的特性，既具有骨髓瘤细胞能无限制增殖的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。经在HAT培养
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