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小鼠重组单克隆抗体制备

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  • 卡梅德生物科技(天津)有限公司作为国家高新技术企业,专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务,单、多克隆抗体开发,噬菌体文库构建与筛选服务;同时,基于我公司成熟的五大核心技术服务平台,成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。
  • 天津
  • 2025年11月05日
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      卡梅德生物科技(天津)有限公司

    • 服务名称

      小鼠重组单克隆抗体制备

    卡梅德生物(KMDTM Bioscience)多年来致力于抗体领域研究。利用噬菌体展示技术开发的重组抗体具有高度特异性,可广泛应用于医药治疗和诊断。我们拥有经验丰富的抗体制备团队,在重组抗体定制方面总结了成熟的技术经验,具有完善的抗体生产设备,能够为客户提供多种形式的重组抗体。
    小鼠单克隆抗体作为常见的单克隆抗体,具体特异性强,批次间差异小等特点,基于成熟的重组蛋白表达平台和抗体制备技术平台,卡梅德生物能够提供包括小鼠等不同物种的重组单抗定制服务。我们拥有配套的标准生产线,不断优化生产流程,经过严格的质量评价,能够获得高产量,高特异性的重组抗体蛋白。此外,卡梅德生物坚持提供完整的上下游服务,涵盖从抗体制备到抗体修饰,亲和力测定等多样技术服务。

    小鼠单克隆抗体制备:

    卡梅德生物拥有两种方式的鼠单克隆抗体制备服务,一种是利用噬菌体抗体展示技术制备重组单克隆抗体;另一种是利用细胞融合技术制备小鼠杂交瘤细胞系。
    在采用噬菌体展示技术制备重组单抗过程中,我们通过将鼠源抗体可变区(Vλ, Vk, VH)克隆进带有M13噬菌体pIII融合蛋白的噬粒系统,随后将筛选到的高特异性和高亲和力的兔源抗体可变区(Vλ, Vk, VH)克隆进带有小鼠抗体骨架蛋白的质粒载体,联合我们的蛋白重组表达平台进行瞬时表达(产量可达-5g/L)。

    制备流程:
    产品细节图片1
    服务内容:
     
    步骤 服务内容 交付材料 周期
    半抗原改造 / 改造后的小分子衍生物LC-MS的鉴定结果 1-2周
    完全抗原制备 卵清蛋白 完全抗原SDS-PAGE、UV或MALDI-TOF鉴定结果 1-2周
    钥孔蓝蛋白
    人血清白蛋白
    人-γ球蛋白
    噬菌体抗体库的制备 抗原乳化,免疫2-3只小鼠2-3次 PCR结果,免疫检测结果(含ELISA的效价和特异性检测结果),实验记录 1-2个月
    收集脾细胞(或者外周血淋巴细胞),可变区基因分离
    噬粒构建,转染表达,文库构建
    抗体筛选,再克隆,抗体表达
    腹水制备,抗体纯化

    我们的服务优势:
    --制备的抗体具有 pM级的亲和性和高特异性;
    --丰富的经验积累,娴熟的操作水平,保证结果准确可靠;
    --严格的质控体系,标准化的操作流程,保证交付高质量的抗体;
    --多种抗体纯化技术与方案可供选择;
    --丰富的抗体表达载体资源;
    --拥有成熟的抗体和重组蛋白平台,实现项目一体化;
    --一站式技术服务:我们的服务包括从抗原设计,合成与修饰,动物免疫,噬菌体文库构建与筛选到下游抗体修饰与应用鉴定;
    --服务可定制:提供个性化定制服务满足客户的实际需求
     公司介绍:

    卡梅德生物科技(天津)有限公司作为国家高新技术企业,专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务,单、多克隆抗体开发,噬菌体文库构建与筛选服务;同时,基于我公司成熟的五大核心技术服务平台,成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。

    核心平台:

    ---噬菌体抗体展示技术平台


    卡梅德生物科技有限公司利用自有的噬菌体(M13,T7噬菌体)展示技术平台,能够为客户提供高性价比的重组VHH抗体(纳米抗体/驼类纳米抗体)制备方案,包括动物免疫,文库建立,文库筛选以及重组抗体的体外表达等。

    产品细节图片2

    ---抗体工程技术平台

    卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台,多克隆抗体制备服务平台,抗体测序与改造平台。 单克隆抗体制备平台:基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台,能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体,同时基于噬菌体展示技术,我司能够制备多物种的重组单克隆抗体,包括小鼠,兔子,骆驼,羊驼以及人单抗。

    多克隆抗体制备服务平台:能够为客户提供兔多抗,羊多抗,骆驼类多抗,牛多抗等多物种的抗体制备服务,根据不同的抗原类型,来自卡梅德生物的抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案,以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。

    抗体一级序列测序平台:为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求,我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务;同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。

    抗体改造技术平台:卡梅德生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备,抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体,均成功交付。

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    ---蛋白表达与纯化服务技术平台

    卡梅德生物科技目前拥有四大蛋白表达平台,能为客户提供优质的蛋白表达技术服务。

    哺乳动物表达平台: 目前公司拥有Freestyle CHO,Expi CHO,CHO-DG44,HEK293F,Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则,全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂,以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系,相比市面常用蛋白表达载体,能够为客户提供更高纯度的蛋白。

    昆虫细胞表达平台:目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9,配套使用的是来自Gibco的培养基,只为更快、更好地为客户提供高质量的产品。利用该蛋白表达平台,我们已经成功制备了多种人源跨膜蛋白,包括多种GPCR家族成员蛋白。

    原核蛋白表达平台:大肠杆菌(E.coli)重组蛋白表达技术经过多年的发展,已经积累了很多的经验。但如果要在大肠杆菌表达体系获得不错的可溶以及高产量的蛋白表达,一个全方位设计的表达策略必不可少。卡梅德生物科技的专家团队在蛋白表达和抗体制备方面具有丰富的经验和知识储备,针对每位客户的需求,我们的都会提供具体的方案设计。

    酵母蛋白表达平台:毕赤酵母,酿酒酵母等蛋白表达体系,适用于需要真核表达蛋白,同时兼具产量与性价比的项目需求特点。

    植物表达平台:为了提供更好的服务,卡梅德生物携手国内重点科研单位共同为客户提供基因烟草瞬时转染技术的植物蛋白表达服务,项目从设计构建到蛋白表达只需要4-6周。该技术平台能够为客户在较短的时间内获得高纯度,高质量的植物来源的蛋白,已解决大部分植物蛋白在上述几大蛋白表达系统中不溶或不表达的难题。

    ---蛋白批量发酵平台

    超高密度发酵技术:卡梅德生物科技能够为客户提供5L,10L,30L,80L体积的贴壁细胞高密度发酵技术服务(微载体贴壁培养技术),人源细胞贴壁细胞培养密度高达4x106个/ml,适用于病毒转染类型的蛋白高产量表达发酵,能够做到1g/L发酵水平。利用该技术平台,我们目前完成的重组抗体发酵表达记录高达4.7g/L发酵水平。

    同时,借助有氧发酵技术,我们能够为客户提供原核和酵母的超高密度发酵服务,采用有氧发酵类型的原核发酵技术,蛋白产量比传统的原核发酵要高(相差接近100倍蛋白产量和得率)。

    ---蛋白纯化技术平台:

    我司分别配制了Akta和BioRad Biological的蛋白纯化仪,同时拥有GE全套填料,包括Sphedax 75/200,500, G25,G100,CMFF,Q-FF,DEAE以及不同规格的预装柱等,能够在1-2周内为客户完成一套蛋白纯化的工艺开发小试方案。我司的科研团队成员均来自国内生物制药企业,硕士博士学历占比98%,因此有能力为客户提供快速,高质量天然蛋白和跨膜蛋白的纯化等优质服务。

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    ---稳定细胞系筛选平台与基础分子生物平台

    稳定细胞系构建平台:卡梅德生物可为客户定制不同类型的稳定细胞系构建与筛选服务,如利用Crisper/Cas9的多物种、多细胞系来源的细胞沉默,敲除,过表达等稳定细胞系;同时我们也为客户提供基于电转或脂质体转染(Lipofectin2000/3000)的稳定转染细胞系构建服务,如CHO细胞蛋白高表达细胞株等。

    卡梅德生物的基础分子生物学平台承担了包括基因克隆,蛋白定量,免疫印迹检测(SDS-PAGE、WB),宿主核酸检测,蛋白抗体亲和纯化,ELISA操作,内毒素检测,HPLC分析,免疫组化,IP,免疫浊度,流式细胞术等服务。

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    相关实验
    • 单克隆抗体制备

      1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交瘤细胞既可产生抗体,又可无性繁殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。 免疫细胞化学的 技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体,由于每种抗原都有几个抗原决定簇,用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体,即多克隆抗体。单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来

    • 单克隆抗体制备过程

      瘤细胞,并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存。    点此查看完整实验步骤 6.  单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。 (1)体内诱生法 取Balb/c小鼠,首先腹腔注射0.5 ml液体石腊或降植烷进行预处理。1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可获得大量

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      小鼠腹水及单细胞悬液制备流程 配制 6% 淀粉肉汤。 6% 淀粉肉汤配制方法:牛肉膏 0.3g、蛋白胨 1.0g、氯化钠 0.5g、蒸馏水 100mL,上述材料混合加热后加入可溶性淀粉 6.0g;溶解后,121℃ 高压灭菌 15~20 min,EP 管分装封口,将肉汤放置于 4℃ 保存。 小鼠腹腔注射 1mL 6% 淀粉肉汤(注意避开肠管和内脏),刺激 60~72h。 颈椎脱臼法处死小鼠,用 75% 酒精浸泡小鼠 5min。 将小鼠置于解剖板中,固定四肢,剪开皮肤,充分暴露腹膜。 用眼

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