DAPI 细胞核探针

产品描述

DAPI，英文全称4’,6-Diamidino-2’-phenylindole，中文全称4’,6-联脒-2’-苯基吲哚，是一种蓝色荧光染料，选择性结合双链DNA的小沟区（优先结合AT富集的DNA）形成稳定的复合物，产生比DAPI约强20倍的荧光。DAPI的最大激发/发射波长为340/488nm，DAPI-DNA复合物的最大激发/发射波长为364/454nm，通常用作荧光显微术、流式细胞术和染色体染色的细胞核复染剂。由于对DNA的高亲和性，DAPI还常常被用在细胞计数、凋亡检测、支原体污染检测、基于DNA内含物的细胞分选，以及高内涵成像分析中的核分割工具。虽然高浓度情况下DAPI能够进入活细胞，但DAPI不具细胞膜渗透性，通常情况用来染固定细胞。对于活细胞染色，Hoechst 33342是一种受欢迎的具细胞膜渗透性的核复染剂。

本品为DAPI的二盐算盐（2HCl），粉末形式，易溶于水。用于细胞核染色时，推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。

产品特性

1）CAS NO：28718-90-3

2）英文同义名：DAPI dihydrochloride; 4’,6-Diamidino-2’-phenylindole dihydrochloride; 2-(4-Amidinophenyl)- 6-indolecarbamidine dihydrochloride; 4′,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride;

3）中文同义名：DAPI二盐算盐；4’,6-联脒-2’-苯基吲哚二盐算盐；

4）分子式：C16H15N5· 2HCl

5）分子量：350.25

6） 纯度：>90% (from N)

7）溶解性：溶于水（1-5mg/ml）

8）Ex/Em：340/488nm（DAPI）；364/454nm（DAPI-DNA）；

9）化学结构：

 

保存与运输方法

保存：室温干燥避光保存，2年有效。

运输：室温运输。

储存液配制

用双蒸水溶解，配制1-5mg/ml的储存液。-20ºC避光保存1年，建议分装保存，避免反复冻融。【注意】：本品不可以用缓冲液直接溶解。

使用方法

1. 工作液配制

用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作浓度（0.5-10μg/ml）。

2. 固定的细胞或组织染色

对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。DAPI染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行DAPI染色。

2.1 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量DAPI染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5min。

2.2 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=364/454nm。

3. 活的细胞或组织染色

3.1 细胞培养物中加入适量DAPI染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。对于六孔板，一个孔通常需加入1ml染色液；对于96孔板，一个孔通常需加入100μl染色液。

3.2 在37℃培养细胞10～20min。

3.3 用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

3.4 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=364/454nm。

注意事项

1）DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2）荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。