Human G-CSF ELISA Kit

碧云天的Human G-CSF ELISA Kit (Human Granulocyte Colony-Stimulating Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人粒细胞集落刺激因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的G-CSF的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为28.5pg/ml，与人EGF、Epo、FGF acidic、FGF basic、GM-CSF、HGF、IFN-γ、IGF-I、IGF-II、IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-13、KGF、LIF、M-CSF、MCP-1、SCF、TGF-α、TGF-β1、VEGF等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
粒细胞集落刺激因子(Granulocyte Colony-Stimulating Factor, G-CSF)是一种分子量为24-25kDa的单体糖蛋白，主要参与调控造血细胞的增殖、分化和激活过程。成熟的人G-CSF具有178个氨基酸长度，包含两个链内二硫键。人和小鼠的G-CSF具有76%的氨基酸同源性，并且具有一定的交叉反应性。G-CSF主要由活化的单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞、星形胶质细胞、神经元细胞和骨髓基质细胞产生，此外，许多肿瘤细胞也能表达G-CSF。
人G-CSF受体(G-CSF R)分子量120kDa，是一种I型跨膜糖蛋白，属于血细胞生成素受体家族。成熟受体蛋白具有603个氨基酸的胞外域、23个氨基酸的跨膜片段以及186个氨基酸的胞内域。受体胞外域包含有N端的免疫球蛋白样区域、细胞因子受体同源区和三个III型纤连蛋白区。人和小鼠G-CSF受体的胞外域具有63%的氨基酸同源性。G-CSF R与配体按2:2比例形成受体-配体复合物。G-CSF R主要在单核细胞、中性粒细胞、巨核细胞、血小板、髓系祖细胞、胚胎滋养层细胞、内皮细胞和多种肿瘤细胞中有所表达。G-CSF和受体结合后主要影响JAK/STAT、SRC家族激酶、PI3K/AKT和Ras/ERK1/2通路。
在体内，G-CSF是粒细胞生成的重要调节因子，G-CSF R的突变会导致先天中性粒细胞减少症。G-CSF能帮助多种造血祖细胞生长，并促进其从骨髓进入血液。G-CSF能够增强成熟中性粒细胞的功能，减少其凋亡。同时G-CSF还能增强M-CSF诱导的单核细胞生成，刺激树突细胞增殖。G-CSF还可以增强T细胞的免疫耐受性，在发生心梗和大脑缺血后，帮助组织尽快恢复。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人G-CSF的浓度，其原理见图1。人G-CSF特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人G-CSF会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人G-CSF抗体后，生物素化抗人G-CSF抗体与人G-CSF结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人G-CSF浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人G-CSF浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PG340-1	人G-CSF抗体预包被板	8孔×12条
PG340-2	样品分析缓冲液	5ml
PG340-3	标准品稀释液	10ml
PG340-4	人G-CSF标准品	2-4瓶
PG340-5	人G-CSF生物素化抗体	10ml
PG340-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PG340-7	洗涤液(20X)	30ml
PG340-8	TMB溶液	10ml
PG340-9	终止液	5ml
PG340-10	封板膜(透明)	2张
PG340-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。