Human sICAM-1 ELISA Kit

碧云天的Human ICAM-1/CD54ELISA Kit (Human Intercellular Adhesion Molecule-1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人细胞内粘附分子1酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的ICAM-1/CD54的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为37.6pg/ml，与人sCD31、ICAM-2、sE-Selectin、sL-Selectin、sVCAM-1，小鼠ICAM-1、VCAM-1等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
细胞内粘附分子(Intercellular Adhesion Molecule-1, ICAM-1)，又称CD54，是一种表达广泛的跨膜糖蛋白，在白细胞迁移和激活过程中具有重要作用。人ICAM-1胞外域具有5个免疫球蛋白样区域，参与形成非共价键相连的二聚体。在组织蛋白酶G、弹性蛋白酶、MMP-9、MMP-14/MT1-MMP和TACE/ADAM17等酶的作用下能够得到游离形式的单体或二聚体ICAM-1。人ICAM-1胞外域与小鼠和大鼠ICAM-1胞外域具有53%的氨基酸同源性。
能够与ICAM-1相互结合的分子主要有白细胞整合素IFA-1(CD11a/CD18)和Mac-1 (CD11b/CD18)。ICAM-1还能与一些非整合素配体相结合，例如CD43/sialophorin、纤维蛋白原、透明质酸、鼻病毒和疟原虫感染的红细胞等。在炎症部位的内皮细胞和上皮细胞中ICAM-1表达会有所上调，参与调节活化的白细胞的迁移和粘附。ICAM-1同样参与血管生成、伤口愈合和骨代谢等过程。
在血液、脑脊液、尿液和支气管肺泡灌洗液中均检测到了游离型ICAM-1的存在，sICAM-1浓度的升高往往与心血管疾病、II型糖尿病、移植器官机能障碍、氧化应激、高血压、肝脏疾病和部分恶性肿瘤相关。sICAM-1能够促进血管生成，是血管内皮细胞激活或出现损伤的判断指标。sICAM-1对于ICAM-1介导的单核细胞对激活的内皮细胞的粘附作用以及NK细胞对肿瘤细胞的清除作用都具有一定的抑制效果。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人ICAM-1/CD54的浓度，其原理见图1。人ICAM-1/CD54特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人ICAM-1/CD54会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人ICAM-1/CD54抗体后，生物素化抗人ICAM-1/CD54抗体与人ICAM-1/CD54结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人ICAM-1/CD54浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人ICAM-1/CD54浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PI498-1	人ICAM-1/CD54抗体预包被板	8孔×12条
PI498-2	标准品稀释液(5X)	20ml
PI498-3	人ICAM-1/CD54标准品	2-4瓶
PI498-4	人ICAM-1/CD54生物素化抗体	10ml
PI498-5	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PI498-6	洗涤液(20X)	30ml
PI498-7	TMB溶液	10ml
PI498-8	终止液	5ml
PI498-9	封板膜(透明)	2张
PI498-10	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组份4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组份严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。