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EAE动物模型

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  • EAE模型是一种通过实验性免疫诱导、用于模拟人类多发性硬化等中枢神经系统自身免疫病的标准化动物实验模型
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      北京百奥思科生物医学技术有限公司

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      EAE动物模型

    实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)作为多发性硬化(MS)的动物模型,其构建过程中实验动物的选择至关重要。不同的物种、品系、年龄和性别都会影响模型的成功率和实验结果的可重复性。以下从多个方面详细分析EAE模型的构建。

     

    PART  01、物种/品系/试剂选择

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    物种选择

    EAE模型最常用的实验动物是啮齿类动物,尤其是大、小鼠。这类动物因其成本低、繁殖快、易于操作且免疫系统与人类有一定相似性,成为EAE研究的主流选择。此外,啮齿类动物的EAE模型能够较好地模拟MS的自身免疫病理特征,为研究MS的发病机制和药物筛选提供了重要平台。

     

    品系选择

    不同品系的动物对EAE的易感性存在显著差异。

    ✔ C57BL/6小鼠:常用的EAE模型动物,因其对髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)诱导的EAE具有高度敏感性。

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    ✔ Lewis大鼠:常用的模型动物,尤其适用于研究维生素等营养物质对EAE的影响。

    ✔ Wistar大鼠:因其稳定的免疫反应和易于操作的特点,常用于T细胞疫苗的研究。

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    年龄和性别

    ✔ 年龄:年轻动物(通常为6-8周龄)因其免疫系统较为活跃,更易诱导EAE模型。

    ✔ 性别:性别差异在EAE模型中也有显著影响。例如,雌性动物在某些研究中表现出更高的发病率和更严重的症状,这可能与激素水平和免疫反应的性别差异有关。

     

    试剂选择

    ✔ 抗原选择:常用的抗原包括髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG35-55)、髓鞘蛋白脂质蛋白多肽(PLP)和髓鞘碱性蛋白(MBP)。其中,MOG35-55是C57BL/6J小鼠诱导EAE的常用抗原。

    ✔ 佐剂:完全福氏佐剂(CFA)是EAE诱导中的常用佐剂,用于增强免疫反应。

    ✔ 百日咳毒素(PTx):用于增强EAE的诱导效果,但其剂量和批次效价需严格控制,以确保模型的一致性。

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    PART  02、免疫操作

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    01、抗原乳化

    将抗原(如MOG35-55)与CFA按比例混合,制备成乳剂。通常,抗原浓度为1-2 mg/mL,CFA与抗原的体积比为1:1。

     

    02、免疫注射

    将乳化后的抗原注射到动物背部皮下或尾根部。通常采用多点注射,每点注射50-100 µL,总剂量为100-200 µg/只。

     

    03、PTx注射

    在免疫当天和免疫后48小时,分别注射PTx(200-500 ng/只,腹腔注射)。PTx的剂量需根据批次效价调整,以确保模型的一致性。

     

    PART  03、模型评估

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    01、临床评分

    从免疫后第7天开始,每天观察动物的临床症状,并按照标准评分系统进行评分。评分标准通常包括体重变化、尾部张力、后肢无力、前肢无力和瘫痪等。

    02、病理学检测

    在发病高峰期(通常为免疫后第16-20天)处死动物,取脑和脊髓组织进行病理学分析。常用染色方法包括H&E染色(观察炎症细胞浸润)和罗克沙尔坚牢蓝染色(观察脱髓鞘情况)。

    03、免疫学检测

    通过流式细胞术或ELISA检测外周血或中枢神经系统中的免疫细胞(如Th17细胞和Treg细胞)及其相关细胞因子(如IL-17和IL-10)。

     

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