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    CRISPR/Cas9基因敲除小鼠|价格|报价|服务

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    定制CRISPR基因敲除小鼠

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    明星小鼠嘉年华
    备注
    周期短,效率高;高嵌合率,生殖遗传稳定
    倒计时
    99000000

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    • 商家诚信度 
    • 入驻年限  12年
    • 广州市黄埔区科学城绿地中央智慧广场E栋501
    • 一、技术原理
              CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)最新出现的一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。CRISPR是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。在这一系统中,crRNA(CRISPR-derived RNA)通过碱基配对与tracrRNA(trans-activating RNA)结合形成双链RNA,此tracrRNA/crRNA二元复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA达到对基因组DNA进行修饰的目的。CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和大鼠基因组特定基因位点进行精确编辑, 目前已经成功应用于大、小鼠基因KO/KI的模型制备。 

      二、CRISPR/Cas9技术特点:
              1、可实现对靶基因多个位点或多个基因同时敲除;
              2、实验周期短,价格低;
              3、可应用于大、小鼠等,无物种限制。
       

      赛业创新性CRISPR-Pro技术
            赛业生物创新性CRISPR-Pro技术,其独特的受精卵处理方式极大地提高了同源重组修复路径的效率,是常规CRISPR/Cas9敲除效率的3倍以上。

       

      CRISPR-Pro技术原理

             Cas9/gRNA复合物在靶位点进行切割,产生双链断裂(DSBDouble-strand break),迫使细胞进行紧急修复。通常条件下,细胞偏向于使用非同源末端连接(NHEJnonhomologous DNA end joining)的方式对断裂的双链进行修复,进而造成靶位点基因的插入/缺失突变。CRISPR-Pro独特的受精卵处理方式,极大地提高了同源重组修复(HDRHomology-directed recombination or repair)路径的效率,使得DNA大片段敲入(KI)及条件性敲除(cKO)得以实现。


      CRISPR
       

      CRISPR-Pro技术优势

      1)周期短,效率高;

      2)高嵌合率,生殖遗传稳定;

      3)可实现DNA大片段敲入(长达10Kb);

      4)可实现条件性敲除(长达4kb);

      5)可实现大片段敲除(长达20kb)。

       

       

      Jackson Lab CRISPR/Cas9基因编辑效率 VS Cyagen CRISPR-Pro基因编辑效率

      CRISPR技术

      ***与Jackson Lab展示的CRISPR/Cas9基因编辑效率相比,赛业生物(CyagenCRISPR-Pro在敲入片段长度与敲入效率方面都更具优势。

       

      CRISPR-Pro服务流程与周期

       

       

      CRISPR-Pro基因敲除常用大小鼠模型

      完全性基因敲除鼠
       

      CRISPR-Pro完全性基因敲除鼠是通过CRISPR /Cas9基因敲除技术,针对靶基因设计和构建gRNACas9表达质粒,造成目的基因的功能区域被敲除,获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。

      CRISPR-Pro完全性基因敲除包括:移码突变、片段基因敲除、双/多基因敲除。

       

      移码突变鼠的建系原则与流程

      1、通过针对靶基因设计、构建相应的gRNA质粒,体外转录为RNA后,与Cas9 mRNA一起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代杂合子鼠;

      2、F0代杂合子鼠与野生型鼠进行交配,获得PCR和测序鉴定阳性的F1代杂合子鼠;
      3、选择来自同一只F0代鼠,基因型一致的F1代鼠,达到性成熟后进行互配,可获得F2代鼠。对获得的F2代鼠进行PCR及测序鉴定,理论上,F2代鼠中25%为纯合子,50%为杂合子,25%为野生鼠。

      片段基因敲除鼠的建系原则与流程

      1、通过针对靶基因不同位点设计、构建相应的一对gRNA质粒,体外转录为RNA后,与Cas9 mRNA一起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代杂合子鼠;

      2F0代杂合子鼠与野生型鼠进行交配,获得PCR鉴定阳性的F1代杂合子鼠;
      3、选择来自同一只F0代鼠,基因型一致的F1代鼠,达到性成熟后互配,可获得F2代鼠。对获得的F2代鼠进行PCR及测序鉴定,理论上,F2代鼠中25%为纯合子,50%为杂合子,25%为野生鼠。


      双(多)基因敲除鼠的建系原则与流程

      1、通过针对两个靶基因分别设计、构建相应的gRNA质粒,体外转录为RNA后,与Cas9 mRNA一起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代多基因杂合子鼠;

      2F0代杂合子鼠与野生型鼠进行交配,获得PCR和测序鉴定阳性的F1代双基因杂合子鼠;

      3、选择双基因杂合子鼠进行杂交,获得F2代鼠。对获得的F2代鼠进行PCR及测序鉴定。

       



      条件性基因敲除鼠
      条件性基因敲除是通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出有两个floxed小鼠。该floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前,该基因表达正常;当floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后,可实现在特定的组织或细胞中敲除该基因,而在其它组织或细胞中该基因表达正常。

       

      建系原则与流程:

      1、与野生型小鼠杂交:阳性CRISPR-Pro小鼠(+/flox)与野生型小鼠(+/+)杂交,获得F1代杂合子小鼠(+/flox);

      2、挑选一对F1代杂合子小鼠(+/flox)进行自交,获得F2代纯合子小鼠(flox/flox)。

       

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