- ￥500
- e.g. pegRNA, 150~250 nt，默认不含修饰碱基
- 南京
- 2025年12月19日
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- 详细信息
- 技术资料
- 提供商：
宜明生物
- 服务名称：
Long gRNA (e.g. pegRNA) IVT synthesis and purification
一、服务概述
Long gRNA (e.g. pegRNA) IVT synthesis and purification 服务聚焦长链向导 RNA（如 Prime Editing Guide RNA，pegRNA）的体外转录（IVT）合成与高纯度纯化，为精准基因编辑领域的科研机构、生物医药企业提供从序列设计、专项制备到严格质控的一站式解决方案。
相较于常规短链 gRNA，长链 gRNA（通常 100-300nt，pegRNA 因含引物结合区与逆转录模板区，长度多为 150-250nt）结构更复杂、合成难度更高，但其在 Prime Editing（引导编辑）、Base Editing（碱基编辑）等精准编辑技术中不可或缺。本服务通过长链 RNA 专属 IVT 体系与定制化纯化工艺，高效合成高活性长链 gRNA，结合多维度质控确保其结构完整性与编辑功能，助力客户在单碱基修复、基因插入 / 缺失、疾病基因精准矫正等领域突破技术瓶颈。
二、核心优势
1. 长链专属 IVT 体系，攻克合成效率与结构稳定难题
针对长链 gRNA 易形成二级结构、转录过程易终止的痛点，研发长链 RNA 专属 IVT 反应体系：采用高 processivity 重组 T7 RNA 聚合酶（经突变优化，延伸能力提升 60%），搭配特殊缓冲液（含二级结构解旋辅助因子），有效抑制转录过程中的链终止现象，使长链 gRNA（如 200nt pegRNA）合成效率较传统体系提升 50% 以上；添加 RNA 伴侣蛋白与抗氧化剂，减少长链 RNA 因折叠导致的聚集与降解，确保产物完整性（完整片段比例≥90%）。针对 pegRNA 的特殊结构（含引物结合区 PBS、逆转录模板区 RT），通过序列预优化（如调整 GC 分布、避免连续互补序列）与转录温度梯度调控，保障关键功能区域的正确合成，避免因结构异常影响引导编辑效率。
2. 精准序列定制，适配多类长链 gRNA 应用场景
基于专业生物信息学平台，提供高度个性化的长链 gRNA 序列设计与合成服务：
- pegRNA 定制：根据靶基因编辑需求（单碱基替换、小片段插入 / 缺失），精准设计 PBS 区（10-15nt，确保与靶位点附近序列互补）、RT 区（含编辑模板，长度按需调整）及向导序列（20nt），支持添加 5' 端磷酸化（增强与 Prime Editor 蛋白结合）、3' 端 2' - O - 甲基化修饰（提升体内稳定性）；
- 其他长链 gRNA 定制：适配 Base Editing 的长链 sgRNA（如携带脱氨酶招募元件）、CRISPRa/i 的长链 gRNA（含转录激活 / 抑制结构域结合位点），可定制荧光标记（FAM/Cy5）或生物素标记，满足可视化追踪与蛋白互作研究需求。同时提供脱靶效应预测（针对长链 gRNA 潜在的额外结合位点）与序列优化建议，降低非特异性编辑风险。
3. 分级纯化工艺，保障长链 RNA 高纯度与低杂质
针对长链 RNA 分子量大、易吸附杂质的特性，采用 “磁珠预纯化 - 高效液相色谱（HPLC）- 超滤脱盐” 分级纯化策略：
- 磁珠预纯化：通过特异性核酸结合磁珠，高效去除未反应核苷酸、短片段 RNA（＜50nt）及部分蛋白杂质；
- HPLC 纯化：采用离子交换柱（针对长链 RNA 的电荷特性优化洗脱梯度），精准分离完整长链 gRNA 与降解片段、DNA 模板、聚合酶等杂质，确保主峰纯度≥98%；
- 超滤脱盐：使用 30kDa 截留分子量超滤膜，去除 HPLC 洗脱液中的盐类与小分子杂质，同时浓缩样品，避免长链 RNA 因反复浓缩导致的降解。最终产品内毒素含量＜0.05 EU/μg，RNase 残留＜0.01 U/μg，满足细胞转染（尤其是干细胞、原代细胞）、动物体内引导编辑实验等高标准需求。
4. 全流程质控，聚焦长链 gRNA 功能有效性
建立针对长链 gRNA 的专项质控体系，覆盖 “合成 - 纯化 - 功能验证” 全流程：
- 结构完整性检测：采用毛细管电泳（CE）与琼脂糖凝胶电泳（高分辨率胶）双重验证，确保长链 gRNA 无明显降解（降解片段比例＜10%），分子量与理论值偏差＜2%；
- 浓度与纯度检测：通过 Qubit 荧光定量仪（选用 RNA 高灵敏度试剂盒）与 Nanodrop 检测，确保 A260/A280 比值 ，A260/A230 比值（无盐类与有机物污染）；
- 功能活性验证：针对 pegRNA，通过体外引导编辑实验（In Vitro Prime Editing Assay），检测其与 Prime Editor 蛋白复合物的编辑效率（提供测序验证数据，编辑效率≥30%）；针对其他长链 gRNA，通过体外切割实验或转录调控实验验证功能活性；
- 稳定性检测：通过 zeta 电位检测评估长链 gRNA 的胶体稳定性（电位绝对值≥15mV，避免储存中聚集），并提供 4℃、-20℃、-80℃储存条件下的稳定性数据（监测 1 个月内的完整性变化）。每批次产品提供详尽质检报告，批次间性能差异＜5%，为实验结果的可重复性提供保障。
5. 灵活交付与增值服务，适配精准编辑科研节奏
配备长链 RNA 专项生产与质控团队，标准订单 5-7 个工作日内完成交付（pegRNA 等复杂结构长链 gRNA 需额外 1-2 个工作日），加急订单最快 3 个工作日出具产物；支持从 μg 级（科研小试，如细胞系编辑验证）到 mg 级（中试生产，如动物模型构建）的产量定制，可根据客户需求分批次交付（避免反复冻融影响长链 RNA 活性）。针对引导编辑高通量筛选项目，提供批量长链 gRNA 合成服务，并可提供混样、分装（按实验需求分至 96 孔 / 384 孔板）及与 Prime Editor 蛋白的预复合物制备服务，大幅提升实验效率。
三、服务规格与交付内容
1. 服务规格
| 服务项目 | 服务详情 |
| 合成类型 | pegRNA、长链 sgRNA（Base Editing/Crispra/i 用）、其他定制长链 gRNA |
| 合成长度 | 100-500nt（常规），支持＞500nt 超长链 gRNA 定制（需提前评估可行性） |
| 修饰选项 | 5' 端：磷酸化、荧光标记（FAM/Cy3/Cy5）、生物素；3' 端：2' - O - 甲基化、荧光标记、生物素；全链修饰：假尿苷、m6A（提升稳定性与降低免疫原性） |
| 产量范围 | 1μg-50mg（可根据需求定制更大规模） |
| 适配系统 | Prime Editing、Base Editing（CBE/ABE）、CRISPRa/i、其他依赖长链 gRNA 的基因编辑系统 |
2. 检测项目
| 检测内容 | 周期 |
| Total Potein Residue | 一周 |
| Plasmid DNA Residue | 一周 |
| Endotoxin assay | 一周 |
| BioBurden | 两周 |
3. 交付内容
- 高纯度长链 gRNA 样本：无菌无酶低吸附离心管分装（避免长链 RNA 吸附管壁，10-200μL / 管），干冰运输，-80℃储存可稳定保存 6 个月以上（建议分装后避免反复冻融）；
- 完整质检报告：根据客户需求可提供包含浓度 / 纯度数据、电泳图谱（CE 与琼脂糖凝胶）、功能活性验证结果（如 pegRNA 引导编辑效率测序报告）、修饰效率检测（如适用）、内毒素与 RNase 残留检测报告；
- 使用指南：涵盖长链 gRNA 溶解方法（推荐使用无酶水，避免剧烈震荡）、与编辑蛋白（如 Prime Editor、Base Editor）的孵育比例（如 1:1.5 molar ratio）、转染条件优化建议（针对长链 RNA 转染效率低的问题，提供转染试剂选择与浓度调整方案）、储存与稳定性说明；
- 原始数据文件：根据客户需求可提供包含电泳原始图谱、荧光定量数据、功能验证实验原始测序数据与分析结果，方便客户追溯与发表需求。
四、应用场景
1. 精准基因编辑基础研究
用于 Prime Editing 技术研究，通过合成高质量 pegRNA，实现靶基因的单碱基修复（如纠正致病点突变）、小片段插入（如标签序列）或缺失，助力基因功能解析（如研究特定氨基酸突变对蛋白功能的影响）；用于 Base Editing 优化，通过长链 gRNA 携带新型脱氨酶或增强子元件，提升碱基编辑效率与编辑窗口，探索复杂基因调控机制。
2. 疾病模型精准构建
在动物模型（小鼠、大鼠、非人灵长类）或类器官模型构建中，通过长链 gRNA（如 pegRNA）介导的精准编辑，实现疾病相关基因突变的定点引入（如模拟人类遗传病的点突变）或矫正（如修复模型动物的致病突变），构建更贴近临床实际的疾病模型，用于药物筛选与治疗方案验证（如评估基因治疗药物对突变位点的修复效果）。
3. 基因治疗研发
针对单基因遗传病（如镰状细胞贫血、囊性纤维化），设计靶向致病突变的 pegRNA，与 Prime Editor 蛋白联合递送（如通过病毒载体或 LNP），实现体内靶基因的精准修复，避免传统 CRISPR-Cas9 导致的双链断裂与随机插入 / 缺失风险；用于 CAR-T 细胞精准改造，通过长链 gRNA 介导的基因编辑（如定点插入 CAR 基因、敲除免疫检查点基因），提升 CAR-T 细胞的抗肿瘤活性与安全性。
4. 合成生物学与工业生物技术
用于微生物（细菌、酵母）的精准代谢工程改造，通过长链 gRNA（如携带代谢通路调控元件）实现关键酶基因的定点突变（提升酶活性）或代谢节点的精准调控，构建高产菌株用于工业酶、生物燃料或药用化合物（如抗生素、抗体片段）的高效合成，推动合成生物学产业应用。
五、服务流程与技术支持
1. 服务流程
- 需求沟通：客户提供靶基因序列、编辑类型（单碱基替换 / 插入 / 缺失）、长链 gRNA 类型（如 pegRNA）、修饰需求及产量要求，技术团队提供序列设计方案（含 PBS/RT 区设计细节）、脱靶预测报告与方案报价；
- 序列确认与合成：客户确认序列后，启动长链专属 IVT 合成，全程监控转录过程（通过实时电泳监测产物完整性）；
- 纯化与质控：完成合成后进行分级纯化，同步开展专项质控检测（含功能活性验证）；
- 交付与售后：质检合格后，产品与报告同步交付，提供后续实验技术支持。
2. 技术支持
- 专业咨询：提供长链 gRNA 设计（尤其是 pegRNA 的 PBS/RT 区优化）、编辑系统选择（如 Prime Editor 版本适配）、转染方案设计等专业咨询，协助解决长链 RNA 转染效率低、编辑效率不稳定等问题；
- 问题解决：针对长链 gRNA 降解、编辑效率不达预期等问题，提供 troubleshooting 方案（如调整储存条件、优化序列结构、调整编辑蛋白比例）；
- 定制化培训：为客户团队提供长链 gRNA 合成与应用相关培训，包括 IVT 原理、长链 RNA 纯化技术、引导编辑实验操作等，提升客户自主实验能力。
Long gRNA (e.g. pegRNA) IVT synthesis and purification 服务以 “长链适配、精准高效、稳定可靠” 为核心，通过专项技术优化与严格质控，为精准基因编辑领域提供高质量长链 gRNA 产品与专业服务，助力科研人员与企业突破长链 RNA 合成技术瓶颈，加速精准基因编辑技术在基础研究与临床转化中的应用。
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IVT synthesized long gRNA
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