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- 2025年08月14日
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粒曼生物基因组定点敲入 Knock-in 系统介绍
- 粒曼生物的定点敲入 Knock-in 稳转细胞系构建系统是基于基于 CRISPR/Cas9 介导的基因组定点修饰技术，配合高效同源重组（HDR）策略，实现在靶细胞中将外源 DNA片段精确插入至细胞基因组的指定位置。
- 与慢病毒和转座子等多位点整合系统不同，定点插入位点可控，遗传表型清楚，不会产生由于随机插入引起对细胞表型的影响。由于整合位点高度特异，如果筛选方法得当，定点插入可以更快速的拿到表型均一的单克隆细胞系，加速研发周期。
- 粒曼生物提供两种不同类型的定点敲入服务，分别是 Harbor 安全港位点敲入（SafeHarbor Knock-in），和基因标记（Gene Tagging）服务
粒曼生物 Harbor 安全港位点敲入（Safe Harbor Knock-in）、基因标记（Gene Tagging）服务，详细内容请见产品资料
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文献和实验这里说的稳转细胞系的构建是指慢病毒转染构建的稳转细胞系，可以构建表达细胞系，也能构建敲降细胞系，经常有人问我什么叫稳转和顺转的区别。瞬转细胞系，一般情况下能够稳定表达最多长一周左右，而稳转细胞系，只要构建成功就能稳定表达，没有时间限制，但是也不是肯定的，一般实验构建的细胞系超过 10 代以后，这个细胞系就有可能不靠谱了。接下来，咱们讲讲稳转细胞系的构建。一般来讲 shRNA 用的是 HIV 病毒，虽然已经经过处理，但是一听这名字也觉得渗人，无论如何保护自己是在实验室永葆青春的基础，所以一定
myskite 将以构建的microRNA质粒稳转至细胞系，有人做过吗，分享一下。 bioenw 我做过miRNA的稳转实验，我们可以进行交流。 版主zhujoker留言: 不要轻易留邮箱以及联系方式。可以站内PM，也不要变相打广告 myskite 我已经构建了pcDNA3.1(+)-premiR的表达载体，正在准备细胞。据说，这个实验，细胞爱死
TALEN和CRISPR/Cas9作为现代分子生物学技术上的一次革新，它结合了转基因技术简便快速，没有物种限制及ES细胞基因打靶技术精准的优点，在短短的几年时间里便受到广大科研人员的青睐。但由于其脱靶效应至今无法避免，且难以胜任大片段的基因敲入，所以还远远谈不上成熟。如何提高TALEN和CRISPR/Cas9的效率和降低脱靶效应将是未来的主要研究方向。基于同源重组的ES打靶是基因敲除的业内金标准，它通过同源重组技术将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造基因组某一基因的目的
