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- 2026年09月29日
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珠海舒桐医疗科技有限公司
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液相杂交捕获AAV整合位点检测
液相杂交捕获检测技术基于碱基互补配对原理，通过设计和合成特异性核酸探针，针对AAV质粒和宿主基因组中的整合区域进行靶向捕获。首先，根据客户提供的AAV质粒设计合成针对AAV质粒全长的特异性探针，待检测的DNA样本需先构建预文库。随后，将预文库与探针进行液相杂交并使用链霉亲和素磁珠进行捕获，从而富集含有AAV序列和宿主基因组序列的整合片段。最后，通过PCR扩增进一步增强整合位点的信号强度并构建最终的测序文库[3]。
相比于仅关注ITR区域的传统方法，该方法采用AAV质粒全长制备特异性探针的检测策略能够更全面地捕捉到AAV的整合情况，进一步提高了AAV整合位点检测的全面性和灵敏度[3]。
图1. 液相杂交捕获检测AAV病毒载体整合流程示意图
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质粒、RNP、AAV、脂质纳米颗粒……CRISPR 的递送方式有很多，但慢病毒始终是最主流的一种。这不是习惯，而是慢病毒的生物学特性恰好匹配了 CRISPR 实验的多个硬需求。 先说结论：慢病毒的核心优势有四个——能感染难转染细胞（包括原代和悬浮细胞）、整合进基因组实现长期表达和抗性富集、可通过 MOI 精确控制感染拷贝数（这是文库筛选的基础）、可包装较大的表达盒。代价是周期较长、Cas9 持续表达增加脱靶累积、以及需要 BSL2 操作条件。 --- 一、优势一：突破"难转染"的限制 脂质
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