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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
保存在常温(RT),2年。
- 保质期:
保存在常温(RT),2年。
- 英文名:
Western Transfer Buffer,10×(powder)
- 库存:
999
- 供应商:
北京索莱宝科技有限公司
- 规格:
1L
电泳转移缓冲液是用于蛋白印迹实验(Western blotting)中湿法以及半干法电泳转膜的缓冲试剂。本产品按常规方法配制而成,为预混粉末,不含SDS和甲醇,可配成10×电泳转移缓冲液,便于储存、操作简便。
10×电泳转移缓冲液成分为: 250mM Tris,1.92 M Glycine。
使用方法:
1、每袋粉剂可配制成1000ml 的10×电泳转移缓冲液。
2、配制时用去离子水或双蒸水作为溶剂。
3、取出包装袋中的全部粉剂溶于800ml 的去离子水或者蒸馏水中,定容至1000ml.
4、本产品不含SDS,蛋白分子量较大或者疏水性较强时,为增加转膜效果,可适当添加少量SDS(参考工作浓度为0.025-0.1%)。
5、1×电泳转移缓冲液配置方法:取100mL 的10×电泳转移缓冲液,用去离子水或者蒸馏水定容至800ml,电泳前加入200 mL无水甲醇,混匀后即可使用。建议现用现加甲醇。
答:您好,这个是普通的转膜液,不是快转的转膜液。
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文献和实验80 V)要低于分离胶电泳电压(建议 110-150 V),以达到更好的浓缩效果,使样品进入分离胶时被压缩在同一水平线上。电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处停止电泳,电泳时间约 2-3 小时。 电转(湿转法) 1) 电泳结束后取出凝胶,在电泳缓冲液中(冷藏的)漂洗数秒。按“三明治”模式,打开电转印夹,每侧垫上一块专用的转膜液浸泡透的海绵垫,再各放一块转膜液浸透的蛋白转移垫(定性滤纸),将凝胶平放在阴极侧滤纸上,最后将转膜液浸透并事先用甲醇浸泡的 PVDF 膜平放在凝胶上,去除气泡,夹好电
1-3 张用转移缓冲液浸泡过的滤纸,逐张叠放,对齐,然后用一玻璃棒作滚筒以挤出所有气泡,必要时可滴加转膜液润湿。 c. 取出浸在转膜液中的凝胶平放于滤纸上。排除所有气泡。 d. 把硝酸纤维素滤膜放在聚丙烯酰胺凝胶上,在硝酸纤维素滤膜与聚丙烯酰胺凝胶之间不留有气泡。 e. 把最后 1-3 张滤纸放在硝酸纤维素滤膜上方,同样须确保不留气泡。其实,用玻棒给点压力很容易排除气泡。 f. 放上另一张或几张海绵垫片,盖上阳极板,夹紧。保证对凝胶有一定的压力。 4)连接电源。我做 90KD 的蛋白
以上。(注意:必须保 证NC 膜始终完全浸于转移缓冲液中) 2 .剪裁与胶同样大小的6 层滤纸,用转移缓冲液浸泡后待用; 3 .取下电泳板,将其平置(使“ 凹” 面玻璃板在下),小心取出夹板中的垫片及去掉 上层玻璃板,切除多余凝胶,将含样品胶用1× 转膜液漂洗一次。 4 .转膜 ① 将样品胶与膜装入标有正、负极的转膜夹板中:由阴极侧开始,依次为海绵垫片 →3 层滤纸→ 样品胶→NC 膜→ 三层滤纸(注意:排除气泡)→ 海绵垫片,扣紧转膜夹板,放入含有转膜缓冲液的转移电泳槽中(见蛋白质转移示意
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