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- Lablead/兰博利德
- T3011
- 2025年11月13日
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产品货号：T3011
储存条件：室温保存
使用说明
稀释后用于蛋白电转移：
l 稀释为1×转移缓冲液含20%甲醇后使用。大部分蛋白质电转移，无甲醇不明显影响转移效果。
注意：本品不含SDS
1、由于蛋白分布的原因，如分布于细胞膜的蛋白疏水性很强，没有SDS存在目的蛋白易沉积在凝胶中。
2、高分子蛋白也有可能出现溶解性不足的可能，特别是处于凝胶上样缓冲液的变性条件和含甲醇的转膜缓冲液的情况下更是如此。
转膜缓冲液里SDS浓度应该不超过0.1%，并保证有足够的平衡时间从凝胶里去除SDS。
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文献和实验；Aprotinin,leupeptin,pepstatin:1 microgram/ml each；Na3VO4: 1 mM；NaF: 1 mM 3. 1X SDS 样品缓冲液：62.5 mMTris-HCl(pH 6.8 于 25° C), 2% w/v SDS, 10%甘油,50 mMDTT, 0.01% w/v溴酚蓝 4. 转移缓冲液：25 mM Trisbase, 0.2 M 甘氨酸, 20%甲醇 (pH 8.3) 5. 10X Tris缓冲盐 (TBS)：准备1L
，最长使用时间一般不宜超过3天。标记好的探针可以保存在 -20℃。3. EMSA 胶的配制：（1） 准备好倒胶的模具。可以使用常规的灌制蛋白电泳胶的模具，或其它适当的模具。最好选择可以灌制较薄胶的模具，以便于干胶等后续操作。为得到更好的结果，可以选择可灌制较大 EMSA 胶的模具。（2） 按照如下配方配制20毫升4%的聚丙烯酰胺凝胶（注意：使用29：1等不同比例的Acr/Bis对结果影响不大）。TBE buffer （10X） 1毫升重蒸水 16.2毫升39：1 acrylamide
以上。（注意：必须保 证NC 膜始终完全浸于转移缓冲液中） 2 ．剪裁与胶同样大小的6 层滤纸，用转移缓冲液浸泡后待用； 3 ．取下电泳板，将其平置（使“ 凹” 面玻璃板在下），小心取出夹板中的垫片及去掉 上层玻璃板，切除多余凝胶，将含样品胶用1× 转膜液漂洗一次。 4 ．转膜 ① 将样品胶与膜装入标有正、负极的转膜夹板中：由阴极侧开始，依次为海绵垫片 →3 层滤纸→ 样品胶→NC 膜→ 三层滤纸（注意：排除气泡）→ 海绵垫片，扣紧转膜夹板，放入含有转膜缓冲液的转移电泳槽中（见蛋白质转移示意
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