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- 少量碱基的插入和缺失
- 江苏省启东市
- 2025年07月30日
- 详细信息
- 文献和实验
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- 提供商：
芳景生物
- 服务名称：
CRISPR Indel
CRISPR Indel
技术优势：
◉适用性广泛：小范围基因编辑，避免敲除对附近相关基因造成影响
◉敲除效率高：针对较难敲除的基因或基因组区域有更好的效果
局限性与解决方案：
◉局限性：可能产生新的未知功能蛋白，对基因功能研究造成表型干扰
◉解决方案：芳景生物可根据客户需求，获取多个移码突变基因型，以减少可能得新蛋白对研究的干扰。
| CRISPR indel(one target) | ||
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
| Target测序 | 1.方法：PCR测序 2.目的：确定注射果蝇品系的靶序列，确保gRNA序列正确并进行有效切割 |
1 |
| gRNA和cas9-mRNA合成制备 | 1.gRNA设计：一个靶位点设计两个gRNA 2.gRNA合成：T7体外转录合成 3.cas9-mRNA合成：优化的cas9-DNA质粒为模板，体外转录合成cas9-mRNA |
2 |
| 显微注射 | 1.注射品系：w1118(或客户指定品系) 2.注射样品：gRNA+cas9-mRNA 3.注射胚胎数量：300-400个 |
2 |
| 杂交鉴定和构建稳定品系 | 1.P0果蝇与平衡子杂交，并进行indel测序鉴定 2.阳性P0的子代F1果蝇与平衡子杂交，并进行indel测序鉴定 3.阳性F1的子代F2果蝇与平衡子杂交，并进行indel测序鉴定 4.阳性F2的子代F3果蝇自交构建稳定品系 5.F3的子代F4果蝇自交构建纯合品系，并进行indel测序鉴定 |
8~10 |
| 合计 | 13~15 |
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文献和实验。 Target 设计 Target 设计：通常情况下我们仅需要在你的目的位置附近找到 NGG（N 代表任意核苷酸），然后找到其紧邻的上游 20 nt 即可（如上图）。 目的位置的选择：我们绝大部分时候的目的是完全 KO 一个基因，其原理是利用移码突变（CRISPR/Cas 系统诱导产生 indel）。所以我们一般选择距离起始密码子 ATG 下游 200bp 范围内的 exon 区域。另外，通常一个基因往往会转录成 2 个以上的 isoforms，所以请选择尽量
近年来，CRISPR技术掀起了基因组编辑的热潮。短短一年间，CRISPR技术已登上了数个知名榜单，包括Science的十大科学突破，Nature Methods的值得关注技术，以及Technology Review的十大突破技术。利用CRISPR技术发表的文章更是层出不穷。今天就和大家分享下CRISPR实验的主要步骤及需要考虑的因素。第一步，你要确定你做CRISPR的目的，即选一个CRISPR系统你要考虑清楚为什么要使用CRISPR系统，是破坏目的基因，还是编辑或修饰目的基因？不同的目的需要
Nature：哈佛大学董民团队利用昆虫细胞全基因组 CRISPR 筛选，揭示杀虫毒素受体
。 与此同时，哈佛医学院 Norbert Perrimon 教授实验室于 2018 年开发了应用于果蝇 S2R+ 细胞全基因 CRISPR/Cas9 筛选的文库，利用整合酶介导的 gRNA 基因组定点整合的方法，不需要使用慢病毒转染。作者发现 pTc 毒素可以通过修饰细胞内肌动蛋白抑制 S2R+ 细胞分裂，但中毒 S2R+ 细胞基因组依然可以保持复制，进而导致中毒 S2R+ 细胞体积随着时间不断增大。 正是利用这一特征，在实际筛选中，作者巧妙地利用 30 微米孔径的细胞筛分离中毒细胞以及对毒素有耐性
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