DNA退火缓冲液（5X）

碘化物缓冲液提取噬菌体单链DNA

碘化物缓冲液： 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA, 4 M NaCl。室温避光贮存。不知道这里面哪个是需要避光的？我怎么没有提出DNA来，不知道是为什么？用的是NEB手册上写的方法。1. 按上述方法进行噬菌斑扩增，在第一步离心后，将500 µl含噬菌体上清转入一新鲜离心管。2. 加200 µl PEG/NaCl，颠倒混匀，室温放置10 min。3. 离心10 min，弃上清液。4. 短暂离心，小心吸去残余上清。5. 沉淀物彻底重悬于100 µl碘化物缓冲液中

PCR 基因扩增原理与步骤大解析

一、实验概要 PCR 扩增目标 DNA 片段。 二、实验原理 多聚酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）基本原理类似于 DNA 的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR 由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。 1. 模板 DNA 的变性：模板 DNA 经加热至 93℃ 左右一定时间后，使模板 DNA 双链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； 2. 模板 DNA 与引物

一种优化的PCR 方法——降落PCR 扩增目的基因

多聚酶链式反应( PCR) 是在模板DNA、引物和4 种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖DNA 聚合酶的酶促反应[1 ] 。在实验室日常工作中经常出现两种情况:一种是因未找到最佳扩增条件导致产生大量非特异性产物,另一种情况是未扩增出任何产物。影响PCR 的因素很多,除了受 PCR 仪器性能的制约外,也取决于反应体系和反应条件的设置,其中Mg2+ 浓度、缓冲液pH 值、循环条件等因素尤为重要,而循环条件中的退火温度又是至关重要的因素。降落PCR 是一种设计多循环以使相连循环的退火