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- 经科
- JK-501
- 国产
- 2025年12月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1ml
产品简介
RNA退火缓冲液即RNA寡核苷酸退火缓冲液，是一种可用于RNA oligo退火的缓冲液。用于siRNA而合成的互补的RNA oligo可以用该退火缓冲液进行退火，以形成双链RNA。
本试剂操作简单，只需把待退火的RNA oligo和退火缓冲液按照一定比例混合后，置于PCR仪上进行程序降温，约60min即可完成。
使用方法（仅供参考）
1. 把待退火的RNA oligo用无酶水（例如：BL510A）配制成200uM，同时彻底溶解退火缓冲液（5×）备用。
2. 按如下反应体系操作
|
步骤 |
组份 |
体积 |
|
1 |
无酶水 |
30μl |
|
2 |
退火缓冲液(5×) |
20μl |
|
3 |
RNA oligo A (200μM) |
25μl |
|
4 |
RNA oligo B (200μM) |
25μl |
|
Total |
100μl |
按照上述步骤，依次加入对应溶液并混匀，如果使用的PCR仪没有热盖设定，可加入Mineral Oil（矿物油）防止在后续反应中液体挥发，一般5-10ul即可。
3. 按如下设定PCR程序，进行退火
|
步骤 |
温度 |
时间 |
作用 |
|
1 |
90℃ |
1min |
Oligo充分变性 |
|
2 |
每5s下降0.1℃，降至25℃ |
约60min |
程序退火 |
|
3 |
-20℃ |
- |
保存 |
注：如果使用的PCR仪无法设定梯度降温功能，也可以选择在经过90℃，1min后，把管子拿出，自然冷却至室温。
4. 反应结束后产物可以直接用于后续实验，如需保存请放于-20℃。
保存条件
-20℃保存，有效期1年。
注意事项
1、 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验棕色小玻璃瓶，标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
，从1mM 到 3mM，间隔 0.5mM 进行一系列反应，确定对于每个模板和引物对的最佳镁离子浓度。 耐热聚合酶 酶量过多 以 0.5U 为间隔适当减少酶量 退火温度 退火温度过低 适当提高退火温度或采用二阶段温度法 PCR 循环次数 PCR 循环次数过多 减少 PCR 循环次数 操作多份样品时，制备反应混合液，先将 dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度； 最后加入反应模板
以及引物与靶标有效退火。退火后，加入反转录酶和必需组分（如缓冲液、dNTPs、RNA 酶抑制剂）。 ❖ DNA 聚合：在此步骤中，反应温度和持续时间可能会根据所使用的引物和反转录酶而变化。使用 oligo (dT)引物（Tm〜35-50 ℃），可以在反转录酶的最佳反应温度（37-50 ℃）下直接孵育反应。随机六聚体引物因其较短的长度，通常具有较低的 Tm（〜10-15℃）。因此，当使用随机六聚体引物（单独使用或与 oligo（dT）结合使用）时，我们建议在加入酶后，在室温（〜25℃）孵育 10
性由两个人工合成的引物序列决定。反应分三步： A.变性：通过加热使 DNA 双螺旋的氢键断裂，形成单链 DNA； B.退火：将反应混合液冷却至某一温度，使引物与模板结合。 C.延伸：在 DNA 聚合酶和 dNTPs 及 Mg2＋存在下，退火引物沿 5‘ —— 3’ 方向延伸。 以上三步为一个循环，如此反复。 3. 逆转录酶和 RT-PCR 逆转录酶（reverse transcriptase）是存在于 RNA 病毒体内的依赖 RNA 的 DNA 聚合酶，至少具有以下三种活性： (1)依赖 RNA
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