维生素C（VC）含量测定试剂盒，比色法

本试剂盒采用比色法测定维生素C（VC）的含量，测定原理如下：Fe3+与还原型抗坏血酸迅速作用生成Fe2+，后者与啡罗啉显色反应，可以测定血浆中维生素C的含量。

该方法的优点包括快速简便，重复性强，适用于适用于可测动物血清/浆、组织等的VC测定。

产品信息

货号	60433ES50
规格	50 T
检测范围	0.2-89.3 μg/mL

组分信息

组分编号	组分名称	装量	储存条件
60433ES-A	试剂一	5 mL×1瓶	2℃～8℃
60433ES-B	试剂二	1支	2℃～8℃
60433ES-C	试剂三	1支	2℃～8℃
60433ES-D	试剂四	0.2 mL×1瓶	2℃～8℃避光
60433ES-E	试剂五	6 mL×1瓶	2℃～8℃
60433ES-F	试剂六	粉剂6 mg×3支	2℃～8℃避光

备注：

1）试剂一应用液配制：用时按照试剂一贮备液：蒸馏水=1：14 稀释，混匀制备。

2）试剂二应用液配制：用时1支粉剂加0.36 mL的冰醋-酸再加水至40 mL，溶解，2℃～8℃保存。

3）试剂三应用液配制：因较难溶解，用前2～4小时加95%酒精或无水乙醇60 mL充分溶解制备，2℃～8℃保存。

4）试剂四应用液配制：用时取0.15 mL 试剂四贮备液加水至25 mL 制备，现用现配。

5）试剂六：600 μg/mL Vc 标准品应用液配制：将 1 支标准品粉剂溶于10mL 试剂一应用液中制备；6 μg/mL VC标准品应用液配制：取600 g/mL VC标准品应用液再用试剂一应用液100倍稀释备用，10分钟内使用。

【注】：维生素C标准品易氧化，因此，最好在样本上清液制备好后再配标准，并在10分钟内进行检测。

 

使用说明

1.仪器试剂准备

含536 nm波长的分光光度计、1 cm光径比色皿（或酶标仪及96孔板）、37℃水浴锅或恒温箱、台式低速离心机、各种规格移液器、双蒸水、生理盐水（0.9%）或PBS（0.1M）、涡旋混匀器、试管或离心管、蛋白测定试剂。

2.样本前处理

1）血清/浆

直接使用。

2）组织

准确称取待测组织的重量，按重量（g）:体积(mL)= 1:9 的比例加入9倍体积的匀浆介质（推荐0.1 mol/L且pH值为7.0-7.4 的磷酸盐缓冲液或0.9%的生理盐水），冰水浴条件机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液（10%匀浆上清）待测，组织匀浆上清需测定其蛋白浓度。

3.上清液制备

取样本(或组织匀浆上清)0.15 mL 加试剂一应用液0.45 mL，旋涡混匀，放置15分钟后离心，3500～4000转/分，离心10分钟，上层清亮液体为上清液。组织样本也可以直接用试剂一应用液作匀浆介质匀浆制备上清液，计算时参考组织计算第二条公式。

4.操作表

试剂	空白管	标准管	测定管
试剂一应用液(mL)	0.4	-	-
6μg/mL Vc标准品应用液(mL)	-	0.4	-
上清液(mL)	-	-	0.4
试剂二应用液(mL)	0.5	0.5	0.5
试剂三应用液(mL)	1	1	1
试剂四应用液(mL)	0.25	0.25	0.25
充分混匀，37℃水浴30分钟。
试剂五(mL)	0.1	0.1	0.1
充分混匀，静置10分钟，波长536 nm，光径1 cm，蒸馏水调零，测各管吸光度值。

5.计算公式

1）液体样本的计算：

VC含量(μg/mL) = (A测定-A空白)/(A标准-A空白) × C标准 × N

其中，C标准：表示标准品浓度，6 μg/mL；N：表示样本测试前稀释倍数(包括前处理稀释倍数4)

2）组织的计算：

VC含量(μg/mgprot) = (A测定-A空白)/(A标准-A空白) × C标准 × N/Cpr

VC含量(μg/g组织) = (A测定-A空白)/(A标准-A空白) × C标准 × N1 × V样总/W

其中，C标准：表示标准品浓度，6 μg/mL；N：表示样本测试前稀释倍数(包括前处理稀释倍数4)；Cpr：表示组织匀浆蛋白浓度，mgprot/mL；N1：表示用试剂一应用液直接处理的样本在测试前的稀释倍数；W：表示样本质量，g；V样总：表示样本用试剂一应用液直接匀浆时加入的试剂一应用液的总体积，mL。

 

2～8℃保存，有效期6个月。