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甲苯胺蓝染色实验组织甲苯胺蓝染色:该染色能够清楚地显示软骨形态潮线等结构,观察软骨组织是否有损伤,软骨呈鲜艳的紫色 (紫红色), 其他为浅蓝色。
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文献和实验甲苯胺蓝染色实验
甲苯胺蓝(toluidine blue)是常用的人工合成染料的一种,属于醌亚胺染料类,这类染料一般含有两个发色团,一个是胺基,一个是醌型苯环,来构成色原显色。染料除有发色团外,还要有能使色原对组织及其他被染物产生亲和力的原子团即助色。助色团能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团,还含有两个助色团,为碱性染料。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。可染细胞核使之呈蓝色;肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色,可用于尖锐湿疣的初筛及肥大细胞的检测。
甲苯胺蓝染色实验流程:
(1)组织切片常规脱蜡至水;
(2)入甲苯胺蓝液染30 min ;
(3)水洗,洗去多余染液;
(4)入冰cu酸液分化,直到胞核和颗粒清晰;
(5)稍水洗,晾干;
(6)二甲苯透明,中性树胶封固。
结果分析:
栓质化组织、木质化组织及单宁呈绿色;厚壁组织、非木质化细胞壁呈红紫色;非木质化细胞复合中层呈红紫色或桃红色;细胞质、RNA、核仁呈红色;细胞核呈蓝色;蛋白质及含蛋白质的混合物呈蓝色或蓝紫色;胼胝体胝质、多糖不着色。
实验流程:多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上,随后即可衔接下一轮单标染色,直至全部标记完成,即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合:1)新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2)梯度乙醇浸片,100% 5min;95% 5min;70% 2min。3)灭菌水洗片1min,重复3次。4)10%中性福尔马林浸片10min,灭菌水洗片1min,重复3次。2.微波修复:1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中,用抗原
大家在实验过程中,是不是经常会用到各种染色法?但是染色方法如此之多,其具体方法与步骤又有什么区别?学霸君非常的贴心,帮大家整理了各种染色方法,并作了汇总。以下是从 A 至 V 的染色大法一览表
水质对免疫组化染色结果的影响显著: 在免疫组化染色过程中,实验用水一般用来配制两种试剂: 01 抗原修复液 包括柠檬酸(pH6.0) 、EGTA(pH 9.0) 和EDTA(pH9.0) 等种类,主要用于抗原修复。在免疫组化染色前,必须进行抗原修复,使抗原决定簇充分暴露,以便完全彻底地与抗体结合。未进行抗原修复的抗体即使阳性,其阳性细胞数量及染色强度要明显比进行过抗原修复的少、弱。电导率高的水因杂质存在容易影响溶液pH值,pH值或高或低都会造成抗原修复不佳,抗原决定簇不能完全彻底暴露
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