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文献和实验- C57小鼠，8-10周，通过颈椎脱位处死，浸入75%乙醇浸泡5分钟，转移到通风柜中的解剖盘中。
- 使用眼科剪和镊子，使髋关节脱臼，保持股骨头完整。
- 用止血钳去除每个股骨头的软骨帽，将组织放入含2%双抗的PBS中。
- 用冰冷的含2%双抗的PBS清洗2-3遍，将关节软骨小心移到2ml离心管中。
- 用眼科剪刀将软骨帽剪成约1mm3的碎片，加入3ml预热的Collagenase D（1.5mg/ml）。
- 放入37℃、80rpm的摇床中进行第一次消化，时间2h 。
- 第一次消化结束后，加入含血清的培养基终止消化，40um的细胞筛过滤后，离心1500rpm，2min。
- 沉淀用DMEM完全培养基重悬，计数，种植在24孔板中。
- 在未消化的组织中加入3ml预热的Collagenase D，放入37℃、80rpm的摇床中进行第二次消化，时间2h，然后收集细胞。
bahai 各位老师好，最近在做阴道壁鳞状细胞的原代培养，一直不见起色，培养不成功，情况就是没有任何细胞长出来，特来请教大家。 看了好多文献，看了很多细胞培养的资料，咨询过很多同学，然后做了多次，都是没有细胞，呵呵 现在有这么几个问题： 1：培养基的选择： 文献中都说用的是K-SFM培养基，我现在是用了K-SFM培养基和DMEM/F12两种培养基同时做，希望对比一下两种培养基的情况。 结果都是
紫色云龙 本人初做细胞，想各位大虾多多指教。不胜感激。 目前的课题做wista大鼠肾上腺细胞原代培养，（也可以做人肾上腺细胞，可以买的到，考虑到没有经验，加上大鼠肾上腺提取也可以做）。 试 剂：hank‘s缓冲液（漂洗用），培养基【DMEM/F12，gibco胎牛血清（用10%），双抗（青链）（用1%）】，胰酶（用大概0.1%），胶原酶1型（用0.1%），透明质酸酶（未到货） 主要仪器
南国小医 近两周SD大鼠的海绵体平滑肌细胞的原代培养老是感染细菌，早上还是好的，到下午就感染了，因为是新手，求一些更详细的操作注意事项，或者一些可以避免的小窍门。万分感谢 dachong99 1. 检查培养箱和培养基，可将空白培养基在培养箱中培养来检查。 2. 具体手术器械、操作者、操作环境等。 这个环节比较多，需要一一排除。建议严格按照protocol进行实验。 南国小医
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