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上海达为科生物科技有限公司
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平板克隆形成实验
| 品牌 | 其他品牌 | 产地类别 | 国产 |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 医疗卫生,生物产业,综合 |
平板克隆形成实验:平板克隆试验可以检测贴壁细胞的克隆形成能力,克隆形成试验可反映细胞群体依赖性和增殖能力。
平板克隆形成实验可以检测贴壁细胞的克隆形成能力,克隆形成试验可反映细胞群体依赖性和增殖能力。一般细胞在体外增殖六代以上,其后代形成的细胞群体称为细胞集落或克隆。每个克隆由单一细胞而来,含有50个以上细胞大小在0.3-1mm之间。通过克隆形成可检测各种理化因素对细胞克隆形成能力的影响。
平板克隆形成实验基本步骤:
1.取对数生长期的各组细胞,分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞并把细胞县浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中衡用。
2.将细胞县液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种合10mL 37"C预温培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。置37℃、5% CO2及饱和温度的细胞培养箱中培养2-3周。
3.经常观察,当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。加甲醛固定细胞5ml固定15分钟。然后安固定液加适量GIMSA应用染色液染10-30分钟然后用流水缓慢洗去染色源,空气干燥。
4.将平皿倒置并叠加一张带网格的适明胶片,用肉眼直接计数克隆或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数,再计算克隆形成率,克隆形成率=克隆数/接种细胞数。
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文献和实验vera21173 我研究的是一个基因对肿瘤细胞增殖的影响,上调这个基因的表达可以促进细胞增殖(CCK-8和平板集落形成实验的结果一致),下调这个基因的表达可以抑制细胞增殖。但有平板集落形成实验有一个奇怪的现象,稳转这个基因的细胞集落形成数量明显比空载细胞多,但集落大小比空载细胞小很多,镜下观察发现空载细胞形成的集落中的细胞很分散,而稳转目的基因的细胞集落中细胞很紧密。请问这能说明什么问题? zhouyongchun_1
细胞集落形成实验 非整倍体无限细胞系和癌细胞株中,仍然存在不同细胞亚群,它们的功能和生长特点有些差异,其中有些亚群细胞对培养环境有较大的适应性和具有较强的独立生存能力,细胞集落率高。纯化细胞群来自一个共同的祖细胞,细胞遗传性状、生物学特性相似,利于实验研究。原代培养细胞和二倍体有限细胞系,细胞集落率很低。细胞集落化培养之前,应先测定细胞集落形成率,以了解细胞在极低密度条件下的生长能力。 目前认为仅有肿瘤干细胞具有形成集落的能力,集落抑制率常用于抗癌药物敏感试验、肿瘤放射生物学试验
,到细胞形成克隆时终止培养。 基本步骤: (1)取对数生长期细胞,用0.25%胰蛋白酶消化并轻轻吹打,使之成为单细胞,作活细胞计数,用含20%胎牛血清的DMEM培养液调整细胞密度至1×106细胞/L。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。 (2)用蒸馏水分别制备出1.2%和0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液,高压灭菌后,维持在40℃中不会凝固。 (3)按1:1比例使1.2%的琼脂糖和2×DMEM培养基(含有2×抗生素和20%的小牛血清)混合后,取3mL混合液注入直径6cm平皿中(10cm平皿加










