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上海达为科生物科技有限公司
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成年小鼠关节软骨细胞原代培养实验
传统培养方法体外培养的软骨细胞经长时间传代培养后往往去分化为成纤维细胞,导致细胞数量及活性下降.如何避免培养过程中的去分化问题,是模拟体内软骨内成骨软骨发育过程的关键.
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文献和实验成年小鼠关节软骨细胞原代培养
- C57小鼠,8-10周,通过颈椎脱位处死,浸入75%乙醇浸泡5分钟,转移到通风柜中的解剖盘中。
- 使用眼科剪和镊子,使髋关节脱臼,保持股骨头完整。
- 用止血钳去除每个股骨头的软骨帽,将组织放入含2%双抗的PBS中。
- 用冰冷的含2%双抗的PBS清洗2-3遍,将关节软骨小心移到2ml离心管中。
- 用眼科剪刀将软骨帽剪成约1mm3的碎片,加入3ml预热的Collagenase D(1.5mg/ml)。
- 放入37℃、80rpm的摇床中进行第一次消化,时间2h 。
- 第一次消化结束后,加入含血清的培养基终止消化,40um的细胞筛过滤后,离心1500rpm,2min。
- 沉淀用DMEM完全培养基重悬,计数,种植在24孔板中。
- 在未消化的组织中加入3ml预热的Collagenase D,放入37℃、80rpm的摇床中进行第二次消化,时间2h,然后收集细胞。
一、 实验材料: 6-8周龄大小鼠;剪刀,镊子,灌流用针头,连接管,玻璃平皿,细胞筛,冰盒 二、实验方法: 1. 培养用液 洗涤培养基:DMEM 基础培养基:DMEM/F12 2. 消化用液 前灌流液T1 ;后灌流液T2 3. 培养基本操作方法 a. 将小/大鼠进行麻醉,待其进入深度麻醉状态后迅速将其固定于解剖板上,于超净台中解剖,暴露肝脏; b. 沿肝门静脉插管固定,灌流前灌流液T1(37℃下预热),流速5ml
实验大纲 骨髓间充质干细胞是多能干细胞。因此,作为再生医学的细胞来源,它是活性研究和临床应用的目标。当骨髓液或骨髓细胞接种在培养皿上时,间充质干细胞会作为粘附细胞增殖。因此,间充质干细胞可以从漂浮的血细胞中分离出来。在此,我们报告了使用 Evident Prov CM20 培养监测系统对间充质干细胞原代培养的远程监测结果。 试验程序 使用补充了 10% 胎牛血清(FBS)和 1% 青霉素链霉素的 Iscove 改良 Dulbecco 培养基(IMDM),将市售人骨髓细胞以 950,000
pennhmp116 细胞原代培养是细胞实验的一个大难题,经常容易污染,不知道大家是否会遇到lz这样或者其他麻烦的问题,又是如何处理的? dauest 严格无菌操作!你那是实验动物没有消毒干净,活力碘泡30分钟,然后酒精洗5分钟在做,动物一定要消毒干净不然白做。 xiaogang0512 肯定是真菌的感染了!赶紧换了,别污染其他的了。 张小建 真菌感染了。没得救。处理
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