
免疫荧光双标
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- 2025年07月20日
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免疫荧光双重标记即利用抗原抗体特异性结合原理,在同一张切片上两个抗原进行同时标记,从而实现定位,定性,半定量的分析
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文献和实验对照。 二、注意事项 1、荧光染色后一般在 1h 内完成观察,或于 4℃ 保存 4h ,时间过长,可能会使荧光提前衰退。 2、每次试验均需设置以下三种对照: (1) 阳性对照:阳性血清+荧光标记物; (2)阴性对照:阴性血清+荧光标记物; (3)荧光标记物对照:PBS +荧光标记物。 三、免疫荧光双标的经验之谈 1、选取一抗时,要求来源于两种不同的动物,我用的是来源于家兔和大鼠的抗体,二抗则是不同荧光信号标记的,我用的是 donkey anti-rabbit-FITC(绿)和donkey anti
问:神经干细胞nestin和EphrinA4的免疫荧光双标怎么做?答:过程和一般的免疫染色一样就是封闭的时候用两种血清混合封闭1:1加入一抗和二抗的时候也是混合加入但是因为稀释浓度不好掌握最好提前作预试~补充一点,荧光双标记必须选择的一抗抗性不同,如一个是兔多抗,一个是鼠单抗,那么二抗分别采用抗兔,抗鼠的不同颜色标记的荧光二抗即可。
法简便可靠,但灵敏度较低。 (2)间接法双重免疫荧光标记:用未标记的两种特异性第一抗体孵育组织或细胞,洗去多余的第一抗体后,再用两种不同的荧光素分别标记的第二抗体孵育组织或细胞,洗去多余的第二抗体,后在荧光显微镜下分别选择两种相应的激发滤片观察,从而对两种抗原 进行定位和定量。使用此法应注意两种特异性第一抗体必须来源于不同种属,且荧光标记第二抗体的种属必须与第一抗体的种属相匹配。 免疫 荧光双标技术中操作要点和注意事项 一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序
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