酵母表达蛋白服务

 

酵母表达蛋白服务

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在重组蛋白的制备过程中，酵母表达系统因其兼具真核修饰能力和微生物表达效率，在科研与工业蛋白生产中发挥着重要作用。我们基于毕赤酵母（Pichia pastoris）开发了标准化、高密度、可扩展的蛋白表达平台，为科研和企业客户提供从基因构建到蛋白纯化的完整服务流程。

我们在多个蛋白类别中积累了丰富的项目经验，擅长处理分泌型、胞内表达蛋白、标签融合蛋白，以及对糖基化、二硫键形成等有特殊要求的重组蛋白。服务平台支持小试到中试量级表达，满足科研实验、结构解析及抗体开发等多类需求。

 

▎服务内容

✔ 表达载体构建 ：针对目标蛋白特性设计融合标签（如 His、FLAG、GST 等），优化密码子，选用强启动子（AOX1、GAP 等），构建表达质粒并完成序列验证。辰辉创聚生物所有构建均基于标准化流程，确保表达起点准确稳定。 

✔  酵母菌株转化与筛选 ：采用电转法将表达质粒导入毕赤酵母，构建重组菌株。随后通过 G418、Zeocin 等抗性筛选，挑选高表达克隆用于后续测试。

✔ 小试表达与条件优化 ：在5–100 mL体系中进行诱导表达，筛选最佳表达条件（诱导时间、温度、pH、碳源浓度等）。采用 SDS-PAGE、Western blot 等方法评估蛋白表达量和可溶性，为后续放大提供依据。 

✔ 高密度发酵表达： 使用缓释诱导体系（甲醇或甘油）进行5–20 L规模表达，依据目标蛋白特性进行通气速率和营养调控优化。辰辉创聚生物构建了成熟的高密度发酵表达平台，适合规模化生产及纯化。 

✔ 蛋白纯化与质量控制 ：根据融合标签选择亲和层析（His、GST等），并结合离子交换、凝胶过滤等手段获得高纯度蛋白。蛋白纯化后可提供完整数据（浓度、纯度、SDS-PAGE、活性检测等），保障下游实验可用性。

 

▎应用案例

✔ 科研合作 | 某大学生命科学研究院

项目目标：表达一类45 kDa的糖基化胞外酶，用于植物信号通路研究，要求具备活性、纯度>95%。
技术方案：构建带His标签的毕赤酵母表达载体，采用AOX1诱导表达，筛选高表达克隆后进行5 L高密度发酵，蛋白以分泌形式产出，Ni-NTA亲和纯化。
交付成果：交付蛋白14 mg，纯度97%，提供表达数据与检测图谱。

✔ 科研合作 | 上海某生物医药技术研究中心

项目目标：构建稳定表达体系，获得跨膜抗原蛋白用于动物免疫。
技术方案：优化序列，构建GAP驱动表达载体，毕赤酵母转化后筛选稳定克隆，10 L规模胞内表达，双步层析纯化。
交付成果：交付蛋白8.7 mg，纯度95%，含质粒、菌株与完整质控报告，小鼠及兔子免疫结果证明有免疫效果。

✔ 科研合作 | XX大学生物医学研究院

项目目标：表达某五次跨膜GPCR膜蛋白，用于结构生物学分析。
技术方案：采用baculovirus表达系统，选择Sf9细胞为表达宿主，优化感染条件和培养参数，实现蛋白表达和纯化。
交付成果：交付蛋白8.7 mg，纯度95%，含质粒、菌株与完整质控报告，小鼠及兔子免疫结果证明有免疫效果。

 

▎技术优势

✔ 毕赤酵母表达系统具备较强的蛋白折叠能力，适合真核蛋白表达

✔ 支持胞外分泌表达，简化纯化流程

✔ 成本控制合理，适合科研与中试并行使用

✔ 标准化流程，表达条件可重复，便于项目放大或技术转移

 

▎常见问题

Q1：酵母表达系统适合表达哪些类型的蛋白？
A：酵母表达系统是一种常用的真核表达平台，兼具较强的蛋白折叠与修饰能力，适合表达结构复杂、有糖基化、含二硫键或分泌型的蛋白。尤其适用于大肠杆菌难以正确表达的真核来源蛋白。

Q2：只提供目标蛋白的氨基酸序列可以启动项目吗？
A：可以的，您只需提供目标蛋白的氨基酸序列或核酸序列（推荐FASTA格式），我们可从基因合成开始，完成表达载体构建、菌株筛选、表达优化及纯化一站式服务。

Q3：小试和大规模发酵都可以提供吗？
A：我们提供灵活的服务规格，从20 mL小试表达到5–20 L的中试发酵均可执行。您可根据研究阶段和预算选择合适规模。

Q4：交付的蛋白有哪些参数信息？可以直接使用吗？
A：交付的蛋白一般包含浓度信息、纯度分析（如SDS-PAGE或Western blot）和表达条件说明。大部分蛋白可直接用于免疫、功能验证等实验，如有特殊用途也可提前沟通优化方案。

Q5：完整服务周期大概多久？
A：标准流程（从基因构建到蛋白纯化）约需4–6周。若项目涉及表达条件优化、大体积发酵或定制化纯化流程，周期适当延长，我们将提供详细时间评估与进度节点。