- ￥800
- 烜雅生物
- XY-ZL0004
- 国产
- 2025年12月18日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
210
- 英文名：
Escherichia coli Nissle1917 Chemically Competent Cell
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
冻存管
英文名称：Escherichia coli Nissle1917 Chemically Competent Cell
形式：冻存管
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，氯化钠：10.0，琼脂：15.0，pH：7.0±0.2（25℃）
生长条件：37℃；18-24h；好氧；
存储条件：-80℃
安全等级：0
操作步骤：
1.感受态细胞放置冰中融化 (或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅 速插入冰中) ，加入目的 DNA (质粒或连接产物) 并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰上静置 25 分钟。
2.42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基LB，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少17h。
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文献和实验实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。转化方法：电击
的制备方法和转化实验的基本操作。【实验原理】将重组质粒转入大肠杆菌的过程称为转化。转化所用的大肠杆菌需要用物理或化学方法特殊处理，使重组 DNA 分子容易进入细胞内，被处理后易于接纳 DNA 分子的细胞称作感受态细胞。下面介绍感受态细胞的制备。【实验试剂与器材】大肠杆菌菌株，LB 培养基，100 mM CaCl2 ，DMSO 或 2-巯基乙醇，离心机，振荡器，冰浴【实验方法与步骤】（一）感受态细胞的制备1. 将大肠杆菌菌株在 LB 琼脂培养基上画线，37 ℃ 培养 12～16 h；2. 次日从琼脂平板上取
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