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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
H1-R;hisH1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pEGFP-HRH1人源基因质粒
别称: H1-R;hisH1
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pCDNA3.0-HA-p53质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6197 bp ds-DNA circular SYN 29-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pEGFP-HRH1
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6197)
AUTHORS admin
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6197
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="CMV enhancer;human cytomegalovirus immediate early
enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="CMV promoter;human cytomegalovirus (CMV) immediate
early promoter"
misc_feature 619..624
/label=Kozak
misc_feature 625..2085
/label=HRH1
/note="Homo sapiens histamine receptor H1 (HRH1),
transcript variant 4, mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_000861.3"
CDS 2143..2862
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/label=EGFP
/note="EGFP;mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
polyA_signal 2985..3106
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 poly(A) signal;SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(3113..3568)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 ori;f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3595..3699
/gene="bla"
/label=bla AmpR promoter
/note="AmpR promoter"
promoter 3701..4058
/label=SV40 promoter
/note="SV40 promoter;SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3909..4044
/label=SV40 ori
/note="SV40 ori;SV40 origin of replication"
CDS 4093..4887
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="NeoR/KanR;confers resistance to neomycin, kanamycin,
and G418 (Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 5119..5166
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="HSV TK poly(A) signal;herpesvirus thymidine kinase
polyadenylation signal"
rep_origin 5495..6083
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="ori;high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggactcag atctcgaggc caccatgagc ctccccaatt cctcctgcct cttagaagac
661 aagatgtgtg agggcaacaa gaccactatg gccagccccc agctgatgcc cctggtggtg
721 gtcctgagca ctatctgctt ggtcacagta gggctcaacc tgctggtgct gtatgccgta
781 cggagtgagc ggaagctcca cactgtgggg aacctgtaca tcgtcagcct ctcggtggcg
841 gacttgatcg tgggtgccgt cgtcatgcct atgaacatcc tctacctgct catgtccaag
901 tggtcactgg gccgtcctct ctgcctcttt tggctttcca tggactatgt ggccagcaca
961 gcgtccattt tcagtgtctt catcctgtgc attgatcgct accgctctgt ccagcagccc
1021 ctcaggtacc ttaagtatcg taccaagacc cgagcctcgg ccaccattct gggggcctgg
1081 tttctctctt ttctgtgggt tattcccatt ctaggctgga atcacttcat gcagcagacc
1141 tcggtgcgcc gagaggacaa gtgtgagaca gacttctatg atgtcacctg gttcaaggtc
1201 atgactgcca tcatcaactt ctacctgccc accttgctca tgctctggtt ctatgccaag
1261 atctacaagg ccgtacgaca acactgccag caccgggagc tcatcaatag gtccctccct
1321 tccttctcag aaattaagct gaggccagag aaccccaagg gggatgccaa gaaaccaggg
1381 aaggagtctc cctgggaggt tctgaaaagg aagccaaaag atgctggtgg tggatctgtc
1441 ttgaagtcac catcccaaac ccccaaggag atgaaatccc cagttgtctt cagccaagag
1501 gatgatagag aagtagacaa actctactgc tttccacttg atattgtgca catgcaggct
1561 gcggcagagg ggagtagcag ggactatgta gccgtcaacc ggagccatgg ccagctcaag
1621 acagatgagc agggcctgaa cacacatggg gccagcgaga tatcagagga tcagatgtta
1681 ggtgatagcc aatccttctc tcgaacggac tcagatacca ccacagagac agcaccaggc
1741 aaaggcaaat tgaggagtgg gtctaacaca ggcctggatt acatcaagtt tacttggaag
1801 aggctccgct cgcattcaag acagtatgta tctgggttgc acatgaaccg cgaaaggaag
1861 gccgccaaac agttgggttt tatcatggca gccttcatcc tctgctggat cccttatttc
1921 atcttcttca tggtcattgc cttctgcaag aactgttgca atgaacattt gcacatgttc
1981 accatctggc tgggctacat caactccaca ctgaaccccc tcatctaccc cttgtgcaat
2041 gagaacttca agaagacatt caagagaatt ctgcatattc gctccaagct tcgaattctg
2101 cagtcgacgg taccgcgggc ccgggatcca ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag
2161 gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac
2221 aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc gatgccacct acggcaagct gaccctgaag
2281 ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc
2341 tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc gaccacatga agcagcacga cttcttcaag
2401 tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac
2461 tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg
2521 aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac atcctggggc acaagctgga gtacaactac
2581 aacagccaca acgtctatat catggccgac aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc
2641 aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac
2701 acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg cccgacaacc actacctgag cacccagtcc
2761 gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc
2821 gccgccggga tcactctcgg catggacgag ctgtacaagt aaagcggccg cgactctaga
2881 tcataatcag ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc
2941 tccccctgaa cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag
3001 cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt
3061 cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttaaggc gtaaattgta
3121 agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac
3181 caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg
3241 agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa
3301 gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt
3361 tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt
3421 agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga
3481 gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc
3541 gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga
3601 acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa
3661 ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagagtc ctgaggcgga aagaaccagc
3721 tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta
3781 tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag
3841 caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa
3901 ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac
3961 taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt
4021 agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga tcgatcaaga gacaggatga
4081 ggatcgtttc gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg
4141 gagaggctat tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg
4201 ttccggctgt cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc
4261 ctgaatgaac tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct
4321 tgcgcagctg tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa
4381 gtgccggggc aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg
4441 gctgatgcaa tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa
4501 gcgaaacatc gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat
4561 gatctggacg aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg
4621 agcatgcccg acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc
4681 atggtggaaa atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac
4741 cgctatcagg acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg
4801 gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc
4861 tatcgccttc ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag
4921 cgacgcccaa cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg
4981 gcttcggaat cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc
5041 tggagttctt cgcccaccct agggggaggc taactgaaac acggaaggag acaataccgg
5101 aaggaacccg cgctatgacg gcaataaaaa gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt
5161 ttgttcataa acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac
5221 cccattgggg ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg
5281 gtgaaggccc agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt
5341 actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga
5401 agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag
5461 cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa
5521 tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag
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5641 tccttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat
5701 acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta
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5821 gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc
5881 gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa
5941 gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc
6001 tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt
6061 caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct
6121 tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc
6181 gtattaccgc catgcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pEGFP-HRH1人源基因质粒
别称: H1-R;hisH1
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pCDNA3.0-HA-p53质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6197 bp ds-DNA circular SYN 29-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pEGFP-HRH1
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6197)
AUTHORS admin
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6197
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="CMV enhancer;human cytomegalovirus immediate early
enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="CMV promoter;human cytomegalovirus (CMV) immediate
early promoter"
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/label=Kozak
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/label=bla AmpR promoter
/note="AmpR promoter"
promoter 3701..4058
/label=SV40 promoter
/note="SV40 promoter;SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3909..4044
/label=SV40 ori
/note="SV40 ori;SV40 origin of replication"
CDS 4093..4887
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/gene="aph(3')-II (or nptII)"
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GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
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replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
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1201 atgactgcca tcatcaactt ctacctgccc accttgctca tgctctggtt ctatgccaag
1261 atctacaagg ccgtacgaca acactgccag caccgggagc tcatcaatag gtccctccct
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1621 acagatgagc agggcctgaa cacacatggg gccagcgaga tatcagagga tcagatgtta
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1981 accatctggc tgggctacat caactccaca ctgaaccccc tcatctaccc cttgtgcaat
2041 gagaacttca agaagacatt caagagaatt ctgcatattc gctccaagct tcgaattctg
2101 cagtcgacgg taccgcgggc ccgggatcca ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag
2161 gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac
2221 aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc gatgccacct acggcaagct gaccctgaag
2281 ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc
2341 tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc gaccacatga agcagcacga cttcttcaag
2401 tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac
2461 tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg
2521 aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac atcctggggc acaagctgga gtacaactac
2581 aacagccaca acgtctatat catggccgac aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc
2641 aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac
2701 acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg cccgacaacc actacctgag cacccagtcc
2761 gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc
2821 gccgccggga tcactctcgg catggacgag ctgtacaagt aaagcggccg cgactctaga
2881 tcataatcag ccataccaca tttgtagagg ttttacttgc tttaaaaaac ctcccacacc
2941 tccccctgaa cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg tttattgcag
3001 cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt
3061 cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttaaggc gtaaattgta
3121 agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac
3181 caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg
3241 agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa
3301 gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt
3361 tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt
3421 agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga
3481 gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc
3541 gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga
3601 acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa
3661 ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagagtc ctgaggcgga aagaaccagc
3721 tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta
3781 tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag
3841 caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa
3901 ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac
3961 taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt
4021 agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaga tcgatcaaga gacaggatga
4081 ggatcgtttc gcatgattga acaagatgga ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg
4141 gagaggctat tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg
4201 ttccggctgt cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc
4261 ctgaatgaac tgcaagacga ggcagcgcgg ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct
4321 tgcgcagctg tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa
4381 gtgccggggc aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg
4441 gctgatgcaa tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa
4501 gcgaaacatc gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat
4561 gatctggacg aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg
4621 agcatgcccg acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc
4681 atggtggaaa atggccgctt ttctggattc atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac
4741 cgctatcagg acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg
4801 gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc
4861 tatcgccttc ttgacgagtt cttctgagcg ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag
4921 cgacgcccaa cctgccatca cgagatttcg attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg
4981 gcttcggaat cgttttccgg gacgccggct ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc
5041 tggagttctt cgcccaccct agggggaggc taactgaaac acggaaggag acaataccgg
5101 aaggaacccg cgctatgacg gcaataaaaa gacagaataa aacgcacggt gttgggtcgt
5161 ttgttcataa acgcggggtt cggtcccagg gctggcactc tgtcgatacc ccaccgagac
5221 cccattgggg ccaatacgcc cgcgtttctt ccttttcccc accccacccc ccaagttcgg
5281 gtgaaggccc agggctcgca gccaacgtcg gggcggcagg ccctgccata gcctcaggtt
5341 actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga
5401 agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag
5461 cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa
5521 tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag
5581 agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg
5641 tccttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat
5701 acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta
5761 ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg
5821 gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc
5881 gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa
5941 gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc
6001 tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt
6061 caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct
6121 tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc
6181 gtattaccgc catgcat
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1097/pCDNA3.1-CD40L人源基因质粒 |
| P1106/pCDNA3.1-3×HA-TERT人源基因质粒 |
| P1107/pFUPI-UbC-TRIM5-CypA人源基因质粒 |
| P1124/HA-HIF1alpha-wt-pBabe-puro人源基因质粒 |
| P2939/pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro-FLAG-HIF2α人源基因质粒 |
| P1125/pECMV-3×FLAG-SET人源基因质粒 |
| P1141/pCDNA3.1-AGK人源基因质粒 |
| P1142/pDsRed2-Dusp6人源基因质粒 |
| P1143/pDsRed2-FMR1人源基因质粒 |
| P1144/pEGFP-FXR2人源基因质粒 |
| P1153/pLEGFP-WT-STAT3人源基因质粒 |
| P4833/pECMV-3×FLAG-SDC1人源基因质粒 |
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