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- 七型胶原酶右侧纹状体注射模型
- 上海
- 2026年01月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
七型胶原酶右侧纹状体注射模型
标准化操作流程
（一）动物选择与术前准备
- 物种选择：
- 大鼠：Sprague-Dawley（SD）大鼠（200–300g），血管结构清晰，操作稳定。
- 小鼠：C57BL/6（20–30g），适用于基因编辑研究。
- 术前处理：
- 禁食12小时，腹腔注射戊ba比妥钠（60mg/kg）或气体麻醉（异氟烷）。
- 恒温维持体温37±0.5℃（避免麻醉低体温影响代谢）。
（二）立体定位与注射关键参数
| 参数 | 大鼠标准坐标 | 小鼠标准坐标 |
|---|---|---|
| 前囟参考 | 前囟为原点（Bregma） | 同左 |
| 前后位（AP） | 前囟后0.5–1.4mm | 前囟后0.2mm |
| 侧方位（ML） | 矢状缝右侧2.0–3.2mm | 矢状缝右侧2.3mm |
| 背腹位（DV） | 颅骨下5.6–6.0mm | 颅骨下3.5mm |
| 注射体积 | 1 μL（浓度0.5–1 U/μL） | 0.5 μL（浓度0.2 U/μL） |
| 注射速度 | 0.1 μL/min（全程10分钟） | 0.05 μL/min（10分钟） |
（三）手术操作规范（以大鼠为例）
- 定位钻孔：
- 头皮正中切口，暴露颅骨，棉签清除软组织确认Bregma点。
- 颅骨钻孔（直径1mm），注意避免损伤硬脑膜。
- 胶原酶注射：
- 匀速推注：全程10分钟匀速注射（手工操作需配合秒表，每6秒推进1小格/50格注射器）。
- 留针防反流：注射后留针5分钟 → 上提1mm → 再留针5分钟。
- 退针与缝合：
- 以1mm/min速度缓慢退针，骨蜡封闭骨孔，缝合头皮。
- 术后护理：
- 单笼保温复苏，术后24小时提供软食，镇痛处理（如布托啡诺）。
模型评价体系
（一）神经功能评分（术后24h起）
| 评分方法 | 评价指标 | 成功标准 |
|---|---|---|
| 改良mNSS | 运动/感觉/反射/平衡（0–18分） | ≥7分 |
| Bederson评分 | 0分（正常）→3分（转圈、瘫痪） | ≥1分 |
| 加西亚评分 | 嗅觉/运动/触觉等6项（3–18分） | ≤12分 |
| 转棒实验 | 运动协调性（跌落潜伏期缩短>30%） | 潜伏期显著降低 |
（二）影像学与病理验证
- MRI动态监测：
- 金标准：T2加权像显示高信号血肿，术后24小时血肿体积达峰值。
- 剂量优化：0.7μL胶原酶可覆盖整个左侧纹状体，7天后形成空洞。
- 组织病理学：
- H&E染色：观察血肿周边神经元坏死、炎性浸润。
- 免疫组化：
- 神经元损伤：NeuN表达降低＞60%。
- 炎症激活：Iba1+（小胶质细胞）、GFAP+（星形胶质细胞）↑。
- 分子机制指标：
- 血肿吸收：血红蛋白（Hb）含量动态监测。
- 神经修复：BDNF表达水平（干细胞治疗关键指标）。
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文献和实验成分相近，它们可以聚集活体内源性 aSyn，使之在 S129 位点超磷酸化、泛素化、形成不溶性沉积，也就是可以模拟早期病理特征。 当把活性 aSyn PFFs 注射到啮齿动物脑中后也会有黑质纹状体病变特征，也就是疾病后期的运动损伤特征。 aSyn PFFs 模型具有其它模型的综合起来的各种优点，如可以模拟前期和后期病理特征，使研究预防性治疗方案成为可能，并且模型中 aSyn PFFs 的引入量并不像病毒载体模型那么高，而且该模型生成过程与实际人脑中发病情况也更相近，即诱发内源性 aSyn 聚集。 下两图分别为原代
类型的神经元也会展现出各种细微的突起特征，以适应多样的神经回路。不同类型的神经元在大脑中形成了复杂的回路。因此，了解详细的神经元形态对于理解正常的神经功能和病理机制至关重要。本文开发了一种策略，在整个大脑中稀疏标记相同类型的神经元，并在自闭症动物模型⸺Shank3 基因敲除（KO）小鼠中测试了其应用。 使用病毒 AAVPHP.eB-hSyn-DIO-EGFP-P2A-EGFPf 注射方式 眼眶后注射 注射计量 病毒滴度1.3E+12 vg/mL，注射体积 100μL 实验
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