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- 自体全血右侧基底节注射模型
- 上海
- 2026年01月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
自体全血右侧基底节注射模型
（一）动物选择与术前准备
- 物种选择：
- 大鼠：SD/Wistar（250–350g），血管韧性好，操作容错率高。
- 小鼠：C57BL/6（20–30g），适用于转基因研究。
- 术前处理：
- 禁食12小时，气体麻醉（异氟烷）或腹腔注射戊ba比妥钠（40mg/kg）。
- 维持体温37±0.5℃（恒温板），股动脉插管监测血压/采血。
（二）手术关键步骤
- 立体定位与钻孔：
- 坐标基准（大鼠）：前囟为原点，定位右侧基底节：
- 经典坐标：前囟前0.2mm + 旁开3.5mm + 腹侧5.5mm。
- 变异坐标：旁开2.9–4.0mm（依物种调整）。
- 钻孔：颅骨钻垂直钻孔（直径1mm），暴露硬脑膜。
-
采血与抗凝处理：
- 采血部位：尾静脉（50μL）、股动脉（100μL）、颈动脉（0.3mL）。
- 抗凝要求：肝素化处理防止凝血（否则导致血肿体积不稳定）。
-
血液注射技术：
- 注射速度：≤10μL/min（推荐2μL/min防反流）。
- 注射体积：
| 物种 | 注射体积（μL） | 血肿直径（mm） |
|---|---|---|
| 大鼠 | 50–100 | 3–5 |
| 小鼠 | 5–30 | 1–2.5 |
- 二次注射法（关键改良）：
- 首次注射50%血量 → 暂停10分钟 → 二次注射剩余血量，显著减少血液反流与死亡率。
- 针头留置：注射后留置2分钟，缓慢退针防渗漏。
- 术后处理：
- 骨蜡封闭骨孔，缝合头皮。
- 单笼饲养+保温复苏，术后镇痛（如布托啡诺）。
模型评价体系
（一）神经功能评分（术后24h起）
| 评分系统 | 评价指标 | 模型成功标准 |
|---|---|---|
| Bederson评分 | 0分（正常）→3分（转圈、瘫痪） | ≥1分 |
| 改良mNSS | 运动/感觉/反射/平衡（0–18分） | >8分（显著缺损） |
| 华娅评分法 | 分值越高神经功能越好（逆向评分） | ≤14分（损伤） |
| 转棒实验 | 运动协调性（跌落潜伏期缩短） | 潜伏期↓>30% |
（二）脑损伤与病理检测
-
血肿体积验证：
- MRI/CT：金标准，动态监测血肿吸收（小型猪适用）。
- TTC染色：梗死区苍白色，但需结合血红蛋白含量校正。
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脑水肿定量：
- 干湿重法：缺血半球含水量 >80%（p<0.05 vs. 对侧）。
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组织病理学：
- H&E染色：观察神经元坏死、炎性浸润。
- 免疫组化/荧光：
- 神经元损伤：NeuN↓ >60%。
- 炎症激活：Iba1+（小胶质细胞）、GFAP+（星形胶质细胞）↑。
- 轴突损伤：MAP-2↓（树突标志）。
- 分子机制指标：
- 铁毒性：铁离子沉积（普鲁士蓝染色）、铁蛋白↑。
- 细胞骨架破坏：PAK1/LIMK1/cofilin通路激活→F-actin/G-actin失衡。
- 表观遗传调控：HHcy模型中BDNF甲基化水平↑。
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