司美格鲁肽浓度质谱检测（LC-MS/MS法）

高灵敏的LC-MS/MS法检测血浆中司美格鲁肽的浓度

杨勇 博士 澄耀生物

Yong Yang, chengyao-biotech

 

摘要：司美格鲁肽（又名索马鲁肽，Semaglutide）是最有效的胰高血糖素样肽 (GLP)-1 类似物之一，已广泛用于治疗 II 型糖尿病和肥胖症。本研究旨在开发一种新型液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS)法，以分析司美格鲁肽在血浆中的浓度，以表征其药代动力学行为。本司根据研究需求，开发了适用于不同种属（人、食蟹猴、大鼠、小鼠、兔子、比格犬）血浆中司美格鲁肽的检测方法。质谱检测设备为SCIEX Triple Quad™ 7500型，正离子MRM多反应通道监测方式。定量下限可达到0.100 ng/mL，适合口服及皮下注射等给药方式。该方法灵敏度高、选择性强，适用于精确定量检测各种基质中司美格鲁肽的浓度。另外本司还开发了测定血浆中N-(8-[2-羟基苯甲酰基]-氨基)辛酸钠)（SNAC）的检测方法。

关键词：LC-MS/MS、司美格鲁肽、药动学、7500型质谱、血浆浓度、检测、定量分析、测定

一、              实验部分

1.       质谱方法： 采用正电喷雾离子源（Electrospray Ionization，ESI）和多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）模式进行质谱信号采集。

2.       样品前处理：采用蛋白沉淀的处理方法，操作简单。

二、              结果部分

y = 0.00124 x + 1.11741e^-5 （r = 0.99699，r² = 0.99399）（权重因子：1/x²）

图1 大鼠血浆司美格鲁肽测定标准曲线图

y = 0.00735 x + 0.000409 （r = 0.9991，r² = 0.9982）（权重因子：1/x²）

图2 人血浆SNAC测定标准曲线图

 

1.       以大鼠血浆为基质，考察司美格鲁肽灵敏度及峰形情况，实验结果表明司美格鲁肽检测峰型良好，如图3：

 

 

 

图3 司美格鲁肽大鼠血浆典型色谱图。（A）空白基质色谱图、（B）标曲STD1（司美格鲁肽1.00 ng/mL，血浆用量25 μL）色谱图、（C）血浆未知样品色谱图。

 

2.       未知样品检测浓度随时间变化药时曲线图，见图4：

（A）

（B）

图4 人口服 Semaglutide（司美格鲁肽）后司美格鲁肽（A）和SNAC（B）的药物浓度-时间曲线图。

 

三、              小结

针对现有技术中司美格鲁肽检测时所需样本体积大、检测耗时长、检测精确度不高和检测下限不足的的技术问题，本方法使用Waters I-Class UPLC色谱串联SCIEX Triple Quad™ 7500型质谱设备平台，建立不同种属血浆中司美格鲁肽检测方法，可对血浆中司美格鲁肽进行快速的定量分析，具有操作简单、特异性好、线性好、准确度高等优点，可以满足药代动力学研究的需要。