- ￥150 - 600
- Arcegen
- N132136
- 美国
- 2025年12月30日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
2× Color qPCR Fluore Green Master Mix (High Rox)
- 保质期：
18个月
- 供应商：
魔兜儿
- 保存条件：
-20度
- 规格：
100T（20μL/rxn）/500T（20μL/rxn）
| 规格： | 100T（20μL/rxn） | 产品价格： | ￥150.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500T（20μL/rxn） | 产品价格： | ￥600.0 |
产品简介
2×Color qPCR Fluore Green Master Mix (High Rox)是2×实时定量PCR扩增预溶液，荧光强度高，灵敏度高和特异性强，扩增产量高。核心组分Taq DNA聚合酶采用抗体法热启动，可以有效抑制样品准备过程中引物退火导致的非特异性扩增；还添加了提升PCR反应扩增效率因子和均衡不同GC含量（30~70%）基因扩增的促进因子，使定量PCR可以在宽泛的定量区域内获得良好的线性关系。
本产品利用不同染料的混合变色反应来监控移液操作，有效减少了移液误差的发生。
产品信息
|
货号 |
N132136E |
N132136S |
|
规格 |
100 T（20 μL/rxn） |
500 T（20 μL/rxn） |
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
N132136E |
N132136S |
|
N132136-A |
2×Color qPCR Master Mix (High Rox) |
1 mL |
5×1 mL |
|
N132136-B |
10×Dilution Buffer |
1 mL |
1 mL |
储存条件
-25~-15℃避光保存，有效期1年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 解冻后Master Mix可能出现絮状或白色沉淀，手握缓慢溶解并上下轻柔颠倒混匀至溶液澄清，不影响试剂性能。
3. 使用前请上下颠倒以混匀Master Mix，请勿vortex避免产生气泡，影响定量结果。Master Mix经混匀短暂离心后即可使用。加样过程中吹打要轻，如果操作不慎Master Mix起泡，需再次离心方可使用。
4. 由于本品检测灵敏度极高，易被空气中气溶胶污染。因此反应体系配制时请于超净工作台内进行，配制过程中请使用灭菌枪头、反应管，条件容许的实验室推荐使用专用的移液枪和带滤芯的枪头。
5. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒（Cat#N132062），以有效去除RNA样品中残留的基因组。
6. 本产品仅用于科研。
使用说明
1. 模板处理
2× Color qPCR Fluore Green Master Mix (High Rox)中包含蓝色染料，10×Dilution Buffer为专用黄色浓缩模板稀释液。使用过程中，如需要进行模板示踪，则需稀释到1X作为模板稀释液使用，然后进行qPCR检测；如不需要进行模板示踪，则不使用Dilution Buffer即可。
2. 推荐qPCR反应体系
|
组分 |
体积 （μL）*** |
体积 （μL）*** |
终浓度 |
|
2×Color qPCR Master Mix (High Rox) |
25 |
10 |
1× |
|
Forward Primer (10 μM)* |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
|
Reverse Primer (10 μM)* |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
|
模板DNA/cDNA** |
x |
x |
- |
|
无菌超纯水 |
Up to 50 |
Up to 20 |
- |
【注】：
*通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。
**如模板为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10，最佳模板加入量以保证扩增得到的Ct值在20-30个循环为宜。
***推荐使用20 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性；上机前需充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
3. 反应程序
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
2 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
10 sec |
40 |
|
退火/延伸* |
60℃ |
30 sec** | |
|
熔解曲线阶段* |
仪器默认设置 |
1 | |
【注】：
*退火温度和时间：请根据引物TM值和目的基因的长度进行调整。
**荧光信号采集：请勿忘记打开荧光信号采集，按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置。
***熔解曲线：通常情况下可以使用仪器默认程序。
4. 引物设计指南
1) 推荐引物长度25 bp左右。扩增产物长度150 bp为佳，可以在100 bp-300 bp内选择。
2) 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
3) 引物碱基分布均匀，避免出现连续的4个相同碱基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
4) 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
5) 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物 3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
6) 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测，只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。
5. 适用机型
本产品中预混了用以校正孔与孔之间荧光信号误差的ROX Reference Dye 1 (高浓度)，适用于以下荧光定量PCR仪：
Applied Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast, StepOne, StepOnePlus;
以及其他需要添加高浓度ROX Reference Dye的荧光定量PCR仪。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验%，避免引物内含有互补序列，3』端尽量不要出现含有连续三个以上的 G 或 C 的片段，真核基因设计引物时最好跨内含子哦。 选择合适 ROX 参照染料 各位同学在选购产品、做实验时，首先要弄清自己实验室的仪器对应哪种 ROX（High 还是 Low）！试剂买回来，样也加好了，最后发现不能用在自家仪器上，内心也一定是很崩溃。诺唯赞的染料法荧光定量专用预混液提供各种 ROX 供选择，如果不想这么麻烦，ChamQTM Universal SYBR® qPCR Master Mix （Q711）那是极好
STD （5）无扩增或 CT 值很大 检查一下你所用的酶是否为化学修饰的热启动酶，预变性时间至少 5 min，如果是高 GC 的模板，可以延长预变性时间至 10 min，预变性时间不够，会导致酶活未完全释放，酶活释放不好，那扩增效率肯定就不行啦，所以大家在用 qPCR 试剂的时候，一定要注意分辨热启动酶的封闭手段哦～ （6）反应结束无扩增曲线出现 这个问题的常见原因，主要可以归结为以下 5 种： 反应循环数不够：一般建议设置循环数为 40。 程序中未设置信号采集步骤：注意
扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书，检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是，需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料，用以校正仪器系统以外的物理误差，比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的，当用此类试剂的时候，应该将 ROX 参比
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
