二代快速、全预混RT-qPCR预混液

本产品是一管式探针法RT-qPCR专用预混液，适用于以RNA为模板的单重或多重定量PCR检测。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。

为了满足客户对高效、便捷的需求，全预混试剂逐步替代分步法试剂而成为主流。本试剂盒采用了新一代抗体法热启动酶、一步法专用逆转录酶和针对一管式全预混RT-qPCR 的特殊缓冲体系，支持提前将引物探针与试剂预混成一管长期保存，检测人员在使用时直接添加模板RNA即可上机检测，可很大程度上解决体系配制加样步骤繁琐、易出错、试剂损耗大、大量样本检测效率低等问题。

此外，该产品添加了dUTP/UDG 系统，可在室温下发挥作用，有效防止气溶胶污染。

针对全预混试剂对性能和稳定性的严苛要求，翌圣生物依托 ZymeEditor™双向分子酶理性设计和定向进化平台，以及高性能单克隆抗体研发平台，筛选出的高封闭率双封闭抗体结合不同表位，确保 Taq DNA 聚合酶的聚合和切割活性被彻底封闭，且又能在反应时迅速失活；同时分子诊断试剂关键原料研发平台对反应体系进行优化，降低体系引物探针之间的二级结构产生概率，优化低值区曲线形态，尽可能提高试剂检出率，经过大量体系测试、调整、验证，正式推出这款通用性强、可实现引探提前预混后37℃加速5天性能不发生变化、30min内出结果的RNA全预混试剂。

1、全预混试剂与非全预混试剂对比测试

实验条件：

货号	16913与16630	检测体系	人呼吸道、人源基因、动物疫病体系，25uL
模板	假病毒模板	模板浓度	300 copies/uL
程序	50℃ 4min；95℃ 30s；45 Cycles (95℃ 5s，60℃ 15s)
结果	扩增各种来源的靶标，两者性能无差异，说明全预混试剂在简化产品形式的基础上，并未牺牲性能，全预混体系仍能做到性能好、通用性强。

 

 

图1. 16913ES全预混体系与16630非全预混体系扩增性能比较

2、全预混试剂稳定性测试

实验条件：

货号	16913ES	检测体系	动物疫病体系，25uL
模板	疫苗模板提取的核酸	模板浓度	/
程序	50℃ 4min；95℃ 30s；45 Cycles (95℃ 5s，60℃ 15s)
结果	试剂与动物疫病多重引探预混，在37℃加速5天，性能不受影响，说明16913ES全预混体系稳定性强。

 

 

图2. 16913ES全预混体系37℃热加速5天后稳定性测试

3、全预混试剂低浓度模板检出率测试

实验条件：

货号	16913ES	检测体系	人呼吸道体系，25uL
模板	HPIV、RSV假病毒	模板浓度	1 copy/uL
程序	50℃ 4min；95℃ 30s；42 Cycles (95℃ 5s，60℃ 15s)
结果	16913ES预混呼吸道多重引探后在37℃加速5天，与-20℃保存、现配现用的试剂相比，扩增曲线峰形、荧光值、Ct值基本没有变化，检出率一致，说明16913ES全预混体系稳定性强、灵敏度高。

 

 

图3. 16913ES全预混体系37℃热加速后灵敏度测试

-25~-15℃保存，有效期1年。