- ￥100 - 900
- Arcegen
- N132061
- 美国
- 2025年12月30日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (gDNA digester plus, for qPCR)
- 保质期：
18个月
- 供应商：
魔兜儿
- 保存条件：
-20度
- 规格：
10 T/100 T
| 规格： | 10 T | 产品价格： | ￥100.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100 T | 产品价格： | ￥900.0 |
产品简介
本产品为以RNA模板合成一链cDNA的经典反转录即用型预混液。产品中所含的核心逆转录酶，经过有效的技术改造，具有优异的热稳定性和模板亲和力，可耐受高达60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板、少量模板以及低拷贝基因的逆转录。另外，本产品中含有gDNA消化组分，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。
本产品反转录产物，可用于下游qPCR应用。推荐搭配：通用多重qPCR探针法预混液（Cat#N132041）、通用qPCR染料法预混液（Cat#N132031）或可示踪qPCR染料法预混液（Cat#N132034、Cat#N132035、Cat#N132036）进行高性能的基因表达分析。
产品规格
|
产品货号 |
N132061E |
N132061S |
|
产品规格 |
10 T |
100 T |
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
N132061E |
N132061S |
|
N132061-A |
RNase-free H2O |
1 mL |
2×1 mL |
|
N132061-B |
5×gDNA Digester Mix |
30 μL |
320 μL |
|
N132061-C |
4×cDNA Synthesis SuperMix |
50 μL |
500 μL |
【注】：C组分4×cDNA Synthesis SuperMix中含有gDNA Digester终止剂。
产品储存
冰袋运输。-20℃保存。有效期18个月。
操作注意
1. B组分5×gDNA Digester Mix和C组分4×cDNA Synthesis SuperMix中均含有高浓度的甘油，使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后，准确吸取。
2. 如果加入RNA模板体积较大（如超过 2 μL），请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE会对gDNA 去除以及反转录产生抑制。
3. 可以不经过基因组去除步骤，直接用C组分4×cDNA Synthesis SuperMix进行逆转录。
4. 反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
6. 本产品仅作科研用途！
操作说明
1. 残留基因组 DNA 去除
在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
|
组分 |
使用量 |
|
RNase Free H2O |
To 15 μL |
|
5×gDNA Digester Mix |
3 μL |
|
Total RNA or mRNA |
RNA：10 pg-5 μg mRNA：10 pg-500 ng |
【注】：20 μL逆转录反应体系建议Total RNA的投入量不超过1 μg。如果目的基因的表达丰度低，最多投入5 μg Total RNA，否则RNA投入量过高，可能会超过后续定量PCR的线性范围。
2. 反转录体系配置
在第1步反应管中直接加入4×cDNA Synthesis SuperMix，用移液器轻轻吹打混匀。
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组分 |
使用量 |
|
第1步反应液 |
15 μL |
|
4×cDNA Synthesis SuperMix |
5 μL |
3. 反转录程序设置
1）标准程序
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温度 |
时间 |
|
25℃ |
5 min |
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55℃ |
15 min |
|
85℃ |
5 min |
【注】：反转录温度推荐使用55℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60℃。
2）快速程序【适用于GC含量≤55%的模板或者简单模板】
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温度 |
时间 |
|
55℃ |
15 min |
|
85℃ |
5 sec |
【注】：逆转录产物可立即用于 qPCR 反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
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文献和实验cDNA，产生 cDNA:RNA 复合物。该过程被称为第一链 cDNA 合成。如果存在 RNase H 活性（如野生型 AMV 和 MMLV 反转录酶），则 cDNA:RNA 复合物中的 RNA 会在第一链合成期间被切割。第一链 cDNA 可以直接用于 RT-PCR 等实验应用中，热稳定 DNA 聚合酶（如 Taq DNA 聚合酶）将复制 cDNA 的互补链。 在 cDNA 文库构建和测序中，将第一链 cDNA 作为模板，获得代表 RNA 靶标的双链 cDNA。这个过程被称为第二链cDNA 合成
一些不必要的重复劳动，从而一战成功（即使不是一战，也少了 n 战）。 RT-PCR 虽然只是逆转 RNA，但却是决定后续 qPCR 或其他实验成功的关键因素，是重中之重。以下几点 tips 请查收： 1. 提取好的 RNA，先检测质量 对 RNA 质量的检测包含 RNA 完整度测定及 RNA 产量测定两部分： （1）RNA 的完整度对 cDNA 的合成结果会产生重要的影响。 通过琼脂糖凝胶电泳进行检测是方法之一，这也是一般实验室最常用的方法。通常完整的真核 RNA 应包括 28S、18
的动态范围或线性度最佳，可确保基因表达定量的准确性。 所选试剂在扩增过程中应产生较高且一致的 cDNA 得率，以获得具有高灵敏度和低变异性的基因表达结果。可考虑预混液形式的逆转录酶用以可以减少实验误差。 RT-qPCR 的一个特殊程序是从未经 RNA 分离的粗细胞裂解物直接进行逆转录。在使用稀缺样本或选用群体内特定细胞的实验，可考虑使用直接 RT-qPCR 法来防止可能的样本损失和低 RNA 回收。 cDNA 克隆和文库构建 cDNA 文库可由代表特定样本中转录序列的 cDNA 克隆组成
