- ￥200 - 1200
- Arcegen
- N132064
- 美国
- 2026年04月01日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
Fast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (for PCR/qPCR)
- 保质期：
一年
- 供应商：
魔兜儿
- 保存条件：
-25~-15℃
- 规格：
10 T/100 T
| 规格： | 10 T | 产品价格： | ￥200.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100 T | 产品价格： | ￥1200.0 |
产品简介
本产品在经典的反转录试剂基础上，优化了反应时间，总反应时长最快可低于6分钟，且具有稳定的检出率、特异性、产量保证，适合具有复杂的RNA模板、少量模板以及低拷贝基因的反转录。
本产品反转录产物，可用于下游PCR或qPCR应用。试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6和Oligo (dT)18，用户可根据需要选择使用。
产品规格
|
产品货号 |
N132064E |
N132064S |
|
产品规格 |
10 T |
100 T |
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
N132064E |
N132064S |
|
N132064-A |
4×Fast cDNA Synthesis Mix (No Dye) |
50 μL |
500 μL |
|
N132064-B |
5×gDNA Digester Mix |
20 μL |
200 μL |
|
N132064-C |
Random Primers（50 μM） |
20 μL |
200 μL |
|
N132064-D |
Oligo d(T)18 Primers (50 μM) |
20 μL |
200 μL |
|
N132064-E |
RNase-free H2O |
200 μL |
2×1 mL |
产品储存
-25℃~ -15℃保存，有效期1年。
操作注意
1. 所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免 RNase 污染。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
操作说明
一、含gDNA去除反转录步骤
1. gDNA消化
在RNase-free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
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组分 |
使用量 |
|
5×gDNA Digester Mix |
2 μL |
|
Total RNA or mRNA |
Total RNA：10 pg-5 μg mRNA：10 pg-500 ng |
|
RNase-free H2O |
Up to 10 μL |
【注】：建议Total RNA的投入量不超过2 μg。如果目的基因表达丰度低，可增加投入量至最多5 μg。
2. 反转录体系配置
|
组分 |
使用量 |
|
上一步反应液 |
10 μL |
|
4×Fast cDNA Synthesis Mix (No Dye) |
5 μL |
|
Oligo d(T)18 Primers（50 μM) or Random Primers（50 μM） |
2 μL |
|
RNase-free H2O |
Up to 20 μL |
【注】：1）引物投入量可根据模板投入量调整，若下游实验为qPCR，可在体系中按推荐量添加 Random Primers；2）建议先加入4×Fast cDNA Synthesis Mix (No Dye)混匀后再加入反转录引物，以保证引物不受gDNA Digester影响；3）体系配制完成后，请用移液器轻轻吹打混匀。
3. 反转录程序设置
|
温度 |
时间 |
|
55℃ |
5 min |
|
85℃ |
5 sec |
二、不含gDNA去除反转录步骤
1. 反转录体系配置
|
组分 |
使用量 |
|
4×Fast cDNA Synthesis Mix (No Dye) |
5 μL |
|
Oligo d(T)18 Primers（50 μM) or Random Primers（50 μM） |
2 μL |
|
Total RNA or mRNA |
Total RNA：10 pg-5 μg mRNA：10 pg-500 ng |
|
RNase-free H2O |
Up to 20 μL |
2. 反转录程序设置
|
温度 |
时间 |
|
55℃ |
5 min |
|
85℃ |
5 sec |
【注】：
1）建议Total RNA的投入量不超过2 μg。如果目的基因的表达丰度低，可增加投入量至最多5 μg。
2）引物投入量可根据模板投入量调整，若下游实验为qPCR，可在体系中按推荐量添加Random Primers；
3）对于高GC含量模板或者复杂模板，可将反转录温度提高到60℃。
4）本产品可合成14 kb以下的cDNA序列，如需得到更长的cDNA产物，可适当延长反转录时间。
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文献和实验逆转录反应，作为分子生物学研究的基本技术之一，已经广泛应用到多个研究领域，可以说是科研人员进行 RNA 功能研究的看家本事。 众所周知，逆转录的应用领域有以下 6 种： 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR） 定量RT-PCR（RT-qPCR） cDNA 克隆和文库构建 cDNA 末端快速扩增（RACE） 基因表达芯片 RNA 测序（RNA-Seq） 今天，小编就整理了一些贴士，帮助大家在面对 6 种不同的应用时，如何正确选择逆转录酶。 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR） 在 RT-PCR
如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
性，与目的模板竞争引物和酶等，可能导致PCR扩增效率的下降，影响定量结果的准确性；另外，并不是每个基因都能在相邻的且大小合适的外显子上找到合适的跨内含子引物，所以，很大部分实验需要在一个外显子上设计引物，这时就必须经过去除基因组DNA步骤，才能得到准确可靠的结果。 传统基因组DNA去除的方法采用对RNA进行处理，由于引入了蛋白（DNase I），后续需要进行氯仿抽提纯化，操作繁琐，耗时长，RNA的回收率低。TIANGEN公司的FastQuantcDNA第一链合成试剂盒（KR106
合成 cDNA，产生 cDNA:RNA 复合物。该过程被称为第一链 cDNA 合成。如果存在 RNase H 活性（如野生型 AMV 和 MMLV 反转录酶），则 cDNA:RNA 复合物中的 RNA 会在第一链合成期间被切割。第一链 cDNA 可以直接用于 RT-PCR 等实验应用中，热稳定 DNA 聚合酶（如 Taq DNA 聚合酶）将复制 cDNA 的互补链。 在 cDNA 文库构建和测序中，将第一链 cDNA 作为模板，获得代表 RNA 靶标的双链 cDNA。这个过程被称为第二链cDNA 合成
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