- ￥200 - 1200
- Arcegen
- N132062
- 美国
- 2025年12月30日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
Fast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (gDNA digester plus, for qPCR)
- 保质期：
一年
- 供应商：
魔兜儿
- 保存条件：
-20度
- 规格：
10 T/100 T
| 规格： | 10 T | 产品价格： | ￥200.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100 T | 产品价格： | ￥1200.0 |
产品简介
本产品是品牌首推的高性能cDNA合成试剂，具有更快的反转录速度，更高的反转录产量，以及极强的残留物耐抑制性，适用于动物、植物以及微生物RNA的反转录反应。同时，试剂中所含的gDNA Digester Mix可消化达1000 ng的DNA，可有效避免RNA模板中的残留DNA污染，保证后续结果更加可靠。
本产品反转录产物，可用于下游qPCR应用。推荐搭配：通用多重qPCR探针法预混液（Cat#N132041）、通用qPCR染料法预混液（Cat#N132031）或可示踪qPCR染料法预混液（Cat#N132034、Cat#N132035、Cat#N132036）进行高性能的基因表达分析。
产品规格
|
产品货号 |
N132062E |
N132062S |
|
产品规格 |
10 T |
100 T |
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
N132062E |
N132062S |
|
N132062-A |
cDNA Fast Synthesis SuperMix |
60 μL |
600 μL |
|
N132062-B |
gDNA Digester Mix |
20 μL |
200 μL |
|
N132062-C |
RNase-free H2O |
200 μL |
2×1 mL |
产品储存
-25℃~ -15℃保存，有效期1年。
操作注意
1. 加样和配液步骤都尽量在冰上操作。
2. 每个组分在使用前都应上下颠倒混匀，低速离心。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4. 本产品仅作科研用途！
操作说明
一、含gDNA去除反转录步骤
1. DNA消化
在RNase-free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。37℃孵育2 min。
|
组分 |
使用量 |
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gDNA Digester Mix |
2 μL |
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Total RNA or mRNA |
Total RNA：10 pg-2 μg mRNA：10 pg-500 ng |
|
RNase-free H2O |
Up to 14 μL |
【注】：建议Total RNA的投入量不超过2 μg。如果目的基因表达丰度低，可增加投入量至最多5 μg。
2. 反转录体系配置（以20μL为例）
|
组分 |
使用量 |
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上一步反应液 |
14 μL |
|
cDNA Fast Synthesis SuperMix |
6 μL |
3. 反转录程序设置
|
温度 |
时间 |
|
50℃ |
5 min |
|
85℃ |
5 sec |
【注】：逆转录产物可直接进行下游qPCR检测。若短时间内不进行下游实验，可放置于4℃保存。若长期保存，建议分装后，于-20°C保存，避免反复冻融。
二、不含gDNA去除反转录步骤
1. 反转录体系配置（以20μL为例）
|
组分 |
使用量 |
|
cDNA Fast Synthesis SuperMix |
6 μL |
|
Total RNA or mRNA |
Total RNA：10 pg-2 μg mRNA：10 pg-500 ng |
|
RNase-free H2O |
Up to 20 μL |
2. 反转录程序设置
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温度 |
时间 |
|
50℃ |
5 min |
|
85℃ |
5 sec |
【注】：逆转录产物可直接进行下游qPCR检测。若短时间内不进行下游实验，可放置于4℃保存。若长期保存，建议分装后，于-20°C保存，避免反复冻融。
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文献和实验模板上结合，并作为新链合成的起点。根据 RNA 模板和下游应用，有三种基本类型的引物可供选用：oligo（dT）引物、随机引物和基因特异性引物（图 3）。 图 3. 反转录中的常用引物。 ❖ Oligo（dT）引物由 12-18 个脱氧胸腺核苷酸组成，可与真核 mRNA 的 poly（A）尾退火。其为从真核生物 mRNA 构建cDNA 文库、全长 cDNA 克隆和 cDNA 3'末端快速扩增（3'RACE）的最佳选择。由于 oligo（dT）引物对 poly（A） 尾的特异性，其不适用于降解
一些不必要的重复劳动，从而一战成功（即使不是一战，也少了 n 战）。 RT-PCR 虽然只是逆转 RNA，但却是决定后续 qPCR 或其他实验成功的关键因素，是重中之重。以下几点 tips 请查收： 1. 提取好的 RNA，先检测质量 对 RNA 质量的检测包含 RNA 完整度测定及 RNA 产量测定两部分： （1）RNA 的完整度对 cDNA 的合成结果会产生重要的影响。 通过琼脂糖凝胶电泳进行检测是方法之一，这也是一般实验室最常用的方法。通常完整的真核 RNA 应包括 28S、18
的动态范围或线性度最佳，可确保基因表达定量的准确性。 所选试剂在扩增过程中应产生较高且一致的 cDNA 得率，以获得具有高灵敏度和低变异性的基因表达结果。可考虑预混液形式的逆转录酶用以可以减少实验误差。 RT-qPCR 的一个特殊程序是从未经 RNA 分离的粗细胞裂解物直接进行逆转录。在使用稀缺样本或选用群体内特定细胞的实验，可考虑使用直接 RT-qPCR 法来防止可能的样本损失和低 RNA 回收。 cDNA 克隆和文库构建 cDNA 文库可由代表特定样本中转录序列的 cDNA 克隆组成
