- ￥40 - 19000
- Arcegen
- N132014
- 美国
- 2025年12月30日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
2× High-Fidelity PCR Master Mix (With Dye)
- 保质期：
一年
- 供应商：
魔兜儿
- 保存条件：
-25~-15℃
- 规格：
100 μL/1 mL/5×1 mL/100×1 mL
| 规格： | 100 μL | 产品价格： | ￥40.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 1 mL | 产品价格： | ￥350.0 |
| 规格： | 5×1 mL | 产品价格： | ￥1350.0 |
| 规格： | 100×1 mL | 产品价格： | ￥19000.0 |
产品简介
本品是即用型2×预混合溶液，包含High-Fidelity DNA Polymerase，dNTPs以及优化的缓冲体系。预混液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体，可简便地进行高特异性的Hot Start PCR。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达13 kb，该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。适用于复杂模板的扩增，扩增产物为平末端。
本试剂盒具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，反应体系只需加入引物和模板即可，并可以通过两步法的程序进行扩增，简化了实验步骤，节省了时间。本产品中含有电泳指示染料，PCR产物可直接进行电泳。另外，该产品还含有特异保护剂，使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。
产品储存
-25~-15℃保存，有效期1年。
操作注意
1) 为了您的安全和健康，请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。
2) 本产品仅作科研用途！
操作说明
推荐PCR反应体系
表1 PCR反应体系
|
组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
|
DNA模板*** |
适量 |
- |
|
Forward Primer (10 μM)** |
2 μL |
0.4 μM |
|
Reverse Primer (10 μM)** |
2 μL |
0.4 μM |
|
2×High-Fidelity PCR Master Mix (With Dye)* |
25 μL |
1× |
|
RNase-free ddH2O |
to 50 μL |
- |
【注】：
1) *在终浓度1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶、2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。
2) ** PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM，推荐0.4 μM。
3) ***不同模板的推荐使用量（25 μL反应体系）:
|
模板种类 |
扩增片段1 kb-10 kb |
|
基因组DNA |
50 ng-200 ng |
|
质粒或病毒DNA |
10 pg-20 ng |
|
cDNA |
1-2.5 μL（不超过PCR反应总体积的1/10） |
推荐PCR反应程序
1) 两步法程序(优先推荐)
表2 PCR反应程序
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
98℃ |
3 min |
1 |
|
变性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
|
延伸 |
68℃ |
30 sec/kb |
|
|
终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
2）三步法程序(常规程序)
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性* |
98℃ |
3 min |
1 |
|
变性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
|
退火** |
60℃ |
20 sec |
|
|
延伸*** |
72℃ |
30 sec/kb |
|
|
终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
【注】：
a. *预变性温度和时间：推荐温度：98°C，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。
b. **退火温度和时间：推荐温度：60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
c. ***延伸温度和时间：推荐温度：72°C。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
3）梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序)
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
98℃ |
3 min |
1 |
|
变性 |
98℃ |
10 sec |
15，每个循环降低1℃ |
|
梯度退火 |
70-55℃ |
20 sec |
|
|
延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
|
|
变性 |
98℃ |
10 sec |
20 |
|
正常退火 |
55℃ |
20 sec |
|
|
延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
|
|
终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
4）不同扩增程序下的特点
|
程序类型 |
两步法 |
三步法 |
梯度退火 |
|
速度 |
最快 |
中等 |
慢 |
|
特异性 |
高 |
中等 |
高 |
|
PCR产量 |
中等 |
最高 |
中等 |
|
检出率 |
高 |
中等 |
高 |
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文献和实验PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶
酶。 图 1.非特异性扩增（左图）与使用热启动 DNA 聚合酶进行的特异性扩增（右图）。 如何为您的 DNA 聚合酶选择正确的形式 还有更多需要考虑的因素。选择可以简化您工作流程的聚合酶形式。PCR 聚合酶形式的选择包括即用型预混液、用于直接凝胶上样的含染料缓冲液以及用于直接 PCR 分析的所有必要成分的完整试剂盒。 使用预混液，您只需添加模板和引物，然后，开始 PCR 实验。如果您想进一步减少操作步骤，使用含染料缓冲液的聚合酶允许 PCR 产物直接凝胶上样（注意：确保染料与下游应用兼容）。直接
扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书，检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是，需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料，用以校正仪器系统以外的物理误差，比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的，当用此类试剂的时候，应该将 ROX 参比
成功做完了逆转录，这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多，即使使用了 qPCR 预混液，也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列（Q411 /Q421 /Q431 /Q441）提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时，引物设计需遵循以下原则：引物长度 18～25bp，产物长度 80～300bp，GC 含量 40～60
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