- ￥60 - 3500
- Arcegen
- N132004
- 美国
- 2025年12月30日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
2×HotStart Genotyping PCR Master Mix (With Dye)
- 保质期：
2年
- 供应商：
魔兜儿
- 规格：
1 mL/5×1 mL/50×1 mL/100×1 mL
| 规格： | 1 mL | 产品价格： | ￥60.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 5×1 mL | 产品价格： | ￥250.0 |
| 规格： | 50×1 mL | 产品价格： | ￥2000.0 |
| 规格： | 100×1 mL | 产品价格： | ￥3500.0 |
产品简介
本品是即用型的PCR预混合溶液，含有HotStart Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化了实验的操作步骤，可以高通量操作并提高实验结果的重现性。HotStart Taq DNA Polymerase是经过配体修饰的热稳定Taq DNA Polymerase，该配体可以随温度变化来调节DNA聚合酶活性。在室温下酶活性被完全封闭，经95°C加热后活性才被释放。Arcegen™ HotStart DNA Polymerase的激活时间只需要2-3 min，兼容现有的PCR程序。本产品防止了在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增，可以有效地进行基因分型实验。
产品规格
|
产品货号 |
N132004E |
N132004S |
N132004M |
N132004L |
|
产品规格 |
1 mL |
5×1 mL |
50×1 mL |
100×1 mL |
产品储存
-25~-15℃储存，有效期2年。干冰运输。
产品应用
本产品主要应用于小鼠基因型鉴定。
操作注意
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅作科研用途！
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μL本品和0.6 μg λDNA -HindIII，37°C下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测：20 μL本品和1 μg λDNA，37°C温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体系中，加入25 μL本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。30个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
操作说明
1. 推荐PCR反应体系
表1 PCR反应体系
|
组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
|
2×HotStart PCR Genotyping Master Mix (With Dye) |
25 |
1× |
|
模板 |
x |
- |
|
正向引物F（10 μM） |
2 |
0.4 μM |
|
反向引物R（10 μM） |
2 |
0.4 μM |
|
ddH2O |
Up to 50 |
- |
不同模板的推荐使用量：
表2 不同模板的推荐使用量
|
模板种类 |
使用量范围（50 μL反应体系） |
|
基因组DNA |
50–100 ng |
|
质粒DNA |
0.1-20 ng |
|
cDNA |
1-5 μL (不超过反应体系的1/10) |
2. 反应程序
表3 PCR反应程序
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
30 sec |
35 |
|
退火* |
50-60℃ |
30 sec |
|
|
延伸** |
72℃ |
30 sec/kb |
|
|
终延伸 |
72℃ |
10 min |
1 |
【注】：
*推荐退火温度和时间：退火温度推荐使用50-60℃。退火时间推荐设置为30 sec，可以在20-30 sec内调节。可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度和时间。
**延伸温度和时间：温度推荐使用72℃。时间推荐使用30-60 sec/kb。
扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。
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文献和实验PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶
酶。 图 1.非特异性扩增（左图）与使用热启动 DNA 聚合酶进行的特异性扩增（右图）。 如何为您的 DNA 聚合酶选择正确的形式 还有更多需要考虑的因素。选择可以简化您工作流程的聚合酶形式。PCR 聚合酶形式的选择包括即用型预混液、用于直接凝胶上样的含染料缓冲液以及用于直接 PCR 分析的所有必要成分的完整试剂盒。 使用预混液，您只需添加模板和引物，然后，开始 PCR 实验。如果您想进一步减少操作步骤，使用含染料缓冲液的聚合酶允许 PCR 产物直接凝胶上样（注意：确保染料与下游应用兼容）。直接
扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书，检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是，需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料，用以校正仪器系统以外的物理误差，比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的，当用此类试剂的时候，应该将 ROX 参比
成功做完了逆转录，这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多，即使使用了 qPCR 预混液，也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列（Q411 /Q421 /Q431 /Q441）提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时，引物设计需遵循以下原则：引物长度 18～25bp，产物长度 80～300bp，GC 含量 40～60
技术资料