- ￥343.20
- 西格
- XG-P2815
- 国产
- 2025年07月06日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
55
- 保质期：
12 个月
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1ml
1、变性温度和时间：
2×Pfu PCR MasterMix（含染料）2×Taq Mix高保真预混液保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P2815 | 2×Pfu PCR MasterMix（含染料）2×Taq Mix高保真预混液 | 1ml |
储存条件：-20℃保存。
制品说明：
本产品包含Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度的减少人为误差。使用时只需加入DNA模板和引物既可。
本产品使用方便快捷，能避免 PCR 操作过程中的污染，使用时只需取适量2×Pfu PCR MasterMix溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积，使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀，操作需在冰上进行。2×PfuPCR MasterMix可以纠正DNA扩增过程中的碱基错配，其PCR产物为平端，可直接用平端载体克隆。
本产品有含染料和不含染料两种。含染料产品中有两种染料|（绿色染料和黄色染料），在电泳时会分开以监测迁移进度。青色的染料在1%的琼脂糖凝胶中与3-5kb DNA片段的迁移率相同。黄色的染料在1%的琼脂糖凝胶中比引物迁移得快（＜50bp）。
产品内容：0.05units/μl Pfu DNA Polymerase (recombinant)、 4mM MgCl2、0.4mM dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
质量控制：经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余 DNA ；能有效地扩增人基因中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。
适用范围：
基因检测：本产品不同批次之间误差很小，特别适合大规模基因检测，半定量PCR实验和微量DNA的检测。
DNA扩增和一些有特殊结构的复杂模板和GC含量高（>60%），有二级结构等的扩增：DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定等。PCR产物不带A，纯化后可直接用平末端载体克隆。
降落PCR与温度梯度PCR的区别：
降落PCR与温度梯度PCR都是对反应体系中的退火温度进行优化，但两者在原理上有所不同。
温度梯度PCR是为了找到最适的退火温度，设置不同的退火温度进行多管PCR，将其分别放置在PCR仪中的不同温度模块进行反应，最终找到最适的退火温度，并进一步以此退火温度进行普通PCR扩增。
降落PCR是为了提高反应的特异性，通过设计一系列不断降低的退火温度，在同一PCR管内进行PCR扩增，最终获得大量的特异性扩增产物。
与温度梯度PCR相比，降落PCR更有优势。温度梯度PCR需要多次反应或多管反应找到最适的退火温度，之后还需以找到的最适退火温度再次进行PCR，才能得到较好的扩增效果，操作比较繁琐。降落PCR只需一次反应就可以获得很好的扩增效果，避免了对每对引物进行最适退火温度的优化和测定工作。
降落PCR适用于不确定引物的最适Tm值，或引物扩增效果不佳时，不了解目的模板同源性程度，使用降落PCR可以快速、特异的得到目的扩增片段。根据不同实验的需要，降落PCR还可与其它PCR方法同时使用，如实时定量降落PCR、竞争降落PCR等。
PCR的特点：
特异性强：使用两对引物进行扩增提高了特异性，第一轮PCR中由外引物错配产生非特异性产物，同时在第二轮PCR中内引物与错误片段配对扩增的概率极低，降低了扩增多个靶位点的可能性。
灵敏度高：进行两轮PCR扩增，可以执行更多的循环，从低拷贝样本中扩增得到足量的产物，克服了单次扩增平台期限制，提高PCR的灵敏度。
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PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶
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