- ￥110 - 4500
- Arcegen
- N132015
- 美国
- 2025年12月30日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
High-Fidelity DNA Polymerase
- 保质期：
一年
- 供应商：
魔兜儿
- 保存条件：
-25~-15℃
- 规格：
10U/100 U/500 U/1000 U
| 规格： | 10U | 产品价格： | ￥110.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100 U | 产品价格： | ￥700.0 |
| 规格： | 500 U | 产品价格： | ￥2500.0 |
| 规格： | 1000 U | 产品价格： | ￥4500.0 |
产品简介
本品是基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。酶溶液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体，可简便地进行高特异性的Hot Start PCR，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达13 kb。本产品配备了优化缓冲液，使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品规格
|
产品货号 |
N132015S |
N132015M |
N132015L |
|
产品规格 |
100 U |
500 U |
1000 U |
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
N132015S (100 U) |
N132015M (500 U) |
N132015L (1000 U) |
|
N132015-A |
High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) |
100 μL |
500 μL |
500 μL×2 |
|
N132015-B |
2×PCR buffer（含Mg2+，dNTPs） |
3×1 mL |
15×1 mL |
30×1 mL |
|
N132015-C |
6×DNA Loading Buffer |
1 mL |
6×1 mL |
12×1 mL |
产品储存
-25~-15℃储存，有效期1年。
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA为模板/引物，74°C，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1 U。
操作注意
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅作科研用途！
操作说明
1. 推荐PCR反应体系
表1 PCR反应体系
|
组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
|
模板** |
x |
- |
|
High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) |
1 |
1 U/50 μL |
|
2×PCR buffer（含Mg2+，dNTPs） |
25 |
1× |
|
正向引物F（10 μM） |
2 |
0.4-0.5 μM |
|
反向引物R（10 μM） |
2 |
0.4-0.5 μM |
|
ddH2O |
Up to 50 |
- |
【注】：使用前请务必将其彻底混匀。
1) 试剂使用：使用前要充分解冻混匀。
2) Mg2+终浓度：体系终浓度为2 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
3) 高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
4) 不同模板的推荐使用量（25 μL反应体系）：
表2 不同模板的推荐使用量
|
模板种类 |
扩增片段1 kb-10 kb |
|
基因组DNA |
50 ng-200 ng |
|
质粒或病毒DNA |
10 pg-20 ng |
|
cDNA |
1-2.5 μL（不超过PCR反应总体积的1/10） |
2. PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。
两步法程序（优先推荐）： 三步法程序（常规程序）：
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
98°C |
3 min |
1 |
预变性1 |
98°C |
3 min |
1 | |
|
变性 |
98°C |
10 sec |
30-35 |
变性 |
98°C |
10 sec |
30-35 | |
|
延伸 |
68°C |
30 sec/kb |
退火2 |
60°C |
20 sec | |||
|
终延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
延伸3 |
72°C |
30 sec/kb | ||
|
|
|
|
|
|
终延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
【注】：
1. 预变性温度和时间：推荐温度：98°C，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2. 退火温度和时间：推荐温度：60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3. 延伸温度和时间：推荐温度：72°C。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）: *不同扩增程序下的特点：
|
步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
程序类型 |
两步法 |
三步法 |
梯度退火 |
|
预变性 |
98°C |
3 min |
1 |
速度 |
最快 |
中等 |
慢 | |
|
变性 |
98°C |
10 sec |
15，每个循环降低1℃ |
特异性 |
高 |
中等 |
高 | |
|
梯度退火 |
70-55°C |
20 sec |
PCR产量 |
中等 |
最高 |
中等 | ||
|
延伸 |
72°C |
30 sec/kb |
检出率 |
高 |
中等 |
高 | ||
|
变性 |
98°C |
10 sec |
20 |
|
|
|
|
|
|
正常退火 |
55°C |
20 sec |
|
|
|
|
| |
|
延伸 |
72°C |
30 sec/kb |
|
|
|
|
| |
|
终延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
|
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|
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文献和实验说起基因组序列数据库，大多数人耳熟能详的是三巨头GenBankEBIDDBJ这些数据库在设计之初虽然考虑了基因组存储的需求，但在基因组分析和数据挖掘上的功能设计则比较欠缺。而 IMG/M 作为新一代基因组数据库的代表，不仅能够完整收录现有数据库的内容，还提供了更完善的数据上传、注释和分析服务，将测序数据储存到 IMG/M 数据库（即将 IMG/M 数据库的登录号填写到文章中）也是被许多顶尖期刊如 Nature Communication 所接受的。IMG/M 数据库接受上传纯培养测序基因
最近市面上出现了很多新一代测序仪产品，例如美国Roche Applied Science公司的454基因组测序仪、 美国Illumina公司和英国Solexa technology公司合作开发的Illumina测序仪、美国Applied Biosystems公司的 SOLiD测序仪、Dover/Harvard公司的Polonator测序仪以及美国Helicos公司的HeliScope单分子测序仪。所 有这些新型测序仪都使用了一种新的测序策略——循环芯片
光报告分子，常用的荧光扫描仪都能够完成。第一代的蛋白芯片和DNA芯片一样是作为一种定性分析的工具，可用于分析样品之间相关蛋白的相对表达丰度；还可以作为DNA芯片的补充，用于研究蛋白和基因表达之间的关系。操作流程Ab Microarray 380抗体芯片并不要求特殊的实验操作，只要一般常规的操作就可以完成以往极为复杂耗时的工作。整个操作流程包括：从50～200mg组织或细胞、体液中进行蛋白质抽提——用Cy5和Cy3两种不同颜色的荧光分子分别标记两个样品——洗去多余的标记分子——与芯片杂交孵育——扫描分析
