犬冠状病毒蛋白；犬冠状病毒（CCV）-S蛋白；犬冠状病毒（C

犬冠状病毒蛋白；犬冠状病毒（CCV）-S蛋白；犬冠状病毒（CCV）-N蛋白；犬冠状病毒原核蛋白；犬冠状病毒抗原

犬冠状病毒（Canine Coronavirus，CCV）是引起犬胃肠道疾病的重要病原体之一：
病毒特性
分类与结构：犬冠状病毒属于冠状病毒科冠状病毒属，为单股正链 RNA 病毒。病毒粒子 直径约 80 - 120 纳米，表面有花瓣状的纤突，使其在电镜下看起来像日冕，故而得名 “冠状病毒”。
抵抗力：该病毒对氯仿等脂溶剂敏感，在 pH 值为 3 - 10 的环境中相对稳定，56℃加热 30 分钟可使其灭活。在寒冷季节，病毒在环境中能存活较长时间，如在粪便中可存活数天至数周。
流行病学
易感动物：主要感染犬，不同年龄、品种的犬均易感，但幼犬的发病率和死亡率较高。此外，猫及其他一些动物也可能感染犬冠状病毒。
传播途径：主要通过接触传播，如病犬与健康犬直接接触，或健康犬接触被病毒污染的环境、物品，如饲料、饮水、垫料等。病毒可经消化道感染，也可通过呼吸道感染。
流行特点：犬冠状病毒病一年四季均可发生，但在冬季和春季较为常见。在犬群密集的地方，如犬舍、宠物店、养殖场等，容易发生流行。
临床症状
感染类型：犬感染冠状病毒后，症状表现多样，可分为轻度感染和重度感染。
轻度感染：常表现为精神沉郁、食欲减退、呕吐、腹泻等症状。腹泻物通常为黄色或黄绿色稀便，有时带有黏液或血液。一般情况下，经过适当的治疗和护理，病犬可在数天内恢复。
重度感染：多见于幼犬或免疫功能低下的犬。病犬会出现严重的呕吐和腹泻，导致脱水、电解质紊乱，精神极度沉郁，体温可能升高或正常。如果不及时治疗，病情会迅速恶化，甚至导致死亡。
诊断方法
临床诊断：根据犬的临床症状，如呕吐、腹泻等胃肠道症状，结合流行特点和饲养环境等因素，可做出初步诊断。但由于犬冠状病毒感染的症状与其他一些肠道疾病相似，如犬细小病毒病、沙门氏菌病等，因此需要进一步的实验室检查来确诊。
实验室诊断：常用的方法有病毒分离与鉴定、血清学检测（如酶联免疫吸附试验、中和试验等）、分子生物学检测（如反转录 - 聚合酶链反应，即 RT - PCR）等。其中，RT - PCR 是一种快速、敏感、特异的诊断方法，可直接检测粪便或组织中的病毒核酸，有助于早期诊断。

结构特点

• CCV - S 蛋白是一种糖蛋白，由约 1250 - 1300 个氨基酸组成，其分子量较大，通常在 180 - 220kDa 之间。
• 该蛋白具有复杂的三级结构，包含多个结构域，如 N 端结构域（NTD）、受体结合结构域（RBD）、七肽重复序列（HR）等。其中，RBD 是 S 蛋白与宿主细胞受体结合的关键部位，决定了病毒的宿主范围和组织嗜性。

主要功能

• 介导病毒与宿主细胞结合：CCV - S 蛋白的 RBD 能够特异性地识别并结合宿主细胞表面的受体，如氨肽酶 N（APN）。这种结合是病毒感染宿主细胞的第一步，决定了病毒能否进入细胞并引发感染。
• 促进病毒 - 细胞膜融合：在与宿主细胞受体结合后，S 蛋白会发生一系列的构象变化，使得其 HR 结构域相互作用，形成一个稳定的六螺旋束结构，从而拉近病毒膜与宿主细胞膜的距离，促进两者的融合，使病毒的遗传物质能够进入宿主细胞内，启动病毒的复制过程。
• 诱导机体免疫反应：作为病毒表面的主要抗原蛋白，S 蛋白具有很强的免疫原性。它能够刺激机体的免疫系统产生特异性的抗体和细胞免疫反应。其中，中和抗体可以与 S 蛋白结合，阻止病毒与宿主细胞的结合和融合，从而发挥抗病毒作用。

在诊断中的应用

• 抗原检测：基于 S 蛋白的抗原检测方法，如免疫胶体金试纸条、ELISA 等，可用于快速检测犬粪便或其他样本中的 CCV - S 蛋白抗原。这些方法具有操作简便、快速、特异性较高等优点，能够在疾病早期对犬冠状病毒感染进行初步筛查，有助于及时发现病例和采取防控措施。
• 抗体检测：利用重组的 CCV - S 蛋白作为抗原，通过 ELISA、间接免疫荧光试验（IFA）等方法可以检测犬血清中的特异性抗体。抗体检测可以帮助判断犬是否感染过 CCV，以及评估疫苗的免疫效果。在疫苗免疫后，通过定期检测抗体水平，可以了解犬对疫苗的免疫应答情况，及时调整免疫策略。

在疫苗研发中的作用

• 亚单位疫苗：CCV - S 蛋白是研发亚单位疫苗的关键抗原。将编码 S 蛋白的基因在体外进行表达，获得重组的 S 蛋白，然后将其制成疫苗。这种疫苗能够诱导机体产生针对 S 蛋白的特异性免疫反应，具有安全性高、免疫原性强等优点。研究表明，以 S 蛋白为基础的亚单位疫苗在动物实验中能够有效保护犬免受 CCV 的感染，减轻临床症状，降低病毒的排毒量。
• 病毒样颗粒疫苗：通过基因工程技术，将 CCV - S 蛋白与其他病毒的结构蛋白一起表达，可以组装成病毒样颗粒（VLPs）。VLPs 具有与天然病毒相似的结构和免疫原性，但不含有病毒的遗传物质，因此安全性更高。VLPs 疫苗能够同时激活机体的体液免疫和细胞免疫反应，是一种很有潜力的新型疫苗候选物。
• 核酸疫苗：将编码 CCV - S 蛋白的 DNA 或 RNA 序列构建成核酸疫苗，通过肌肉注射或基因枪等方法导入犬体内。在犬体内，核酸疫苗可以表达出 S 蛋白，从而诱导机体产生免疫反应。核酸疫苗具有易于制备、稳定性好、能够诱导长期免疫记忆等优点，是 CCV 疫苗研发的一个重要方向。

结构特征

• CCV - N 蛋白由约 422 个氨基酸组成，分子量约为 45 - 50 kDa。
• 它具有较高的保守性，在不同的 CCV 毒株之间氨基酸序列相似度较高。该蛋白包含多个功能结构域，其 N 端结构域富含精氨酸和赖氨酸等碱性氨基酸，具有较强的核酸结合能力；C 端结构域则较为灵活，可能参与蛋白 - 蛋白相互作用。

主要功能

• 病毒基因组包装：在病毒复制过程中，N 蛋白能够与病毒的 RNA 基因组紧密结合，将其包装成核衣壳结构。这种包装作用不仅保护了病毒的遗传物质免受核酸酶的降解，还为病毒粒子的组装提供了结构基础。
• 调节病毒复制与转录：N 蛋白可以与病毒的复制酶复合物相互作用，参与调节病毒基因组的复制和转录过程。研究表明，N 蛋白能够影响病毒 RNA 的合成效率和准确性，对病毒在宿主细胞内的增殖至关重要。
• 免疫原性：N 蛋白是一种重要的免疫原，能够刺激机体产生强烈的免疫反应。在病毒感染后，机体的免疫系统会识别 N 蛋白上的抗原表位，产生特异性的抗体和细胞免疫应答。这些免疫反应在一定程度上有助于机体清除病毒，但也可能参与病毒感染引起的免疫病理过程。

在诊断中的应用

• 抗原检测：由于 N 蛋白在病毒感染过程中大量表达，且在病毒粒子中含量丰富，因此常被用作抗原检测的靶标。目前已有多种基于 N 蛋白的抗原检测方法，如免疫层析法、ELISA 等。这些方法可以快速检测犬粪便或其他临床样本中的 CCV - N 蛋白，为犬冠状病毒感染的早期诊断提供了有力手段。与传统的病毒分离培养方法相比，抗原检测方法具有快速、简便、特异性强等优点，能够在短时间内给出检测结果，有助于及时采取防控措施。
• 抗体检测：以重组 N 蛋白为抗原，通过 ELISA、间接血凝试验等方法可以检测犬血清中的特异性抗体。抗体检测可以用于判断犬是否感染过 CCV，以及评估疫苗的免疫效果。在疫苗接种后，定期检测犬血清中的 N 蛋白抗体水平，可以了解疫苗诱导的免疫反应情况，为优化免疫程序提供依据。此外，抗体检测还可以用于流行病学调查，了解犬群中 CCV 的感染率和免疫状况。

在疫苗研发中的潜力

• 尽管目前 CCV 疫苗研发主要集中在 S 蛋白上，但 N 蛋白也具有一定的疫苗研发潜力。N 蛋白的免疫原性较强，能够诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应。研究发现，将 N 蛋白与佐剂联合使用或通过基因工程技术构建表达 N 蛋白的载体疫苗，在动物实验中能够诱导一定程度的免疫保护作用，减轻病毒感染引起的临床症状。因此，N 蛋白可以作为 CCV 疫苗研发的辅助抗原，与 S 蛋白等其他抗原联合使用，以增强疫苗的免疫效果，提高对犬冠状病毒感染的保护力。

• 蛋白纯度： 大于95%（SDS-PAGE电泳）
  品牌：PhyCell/费雪
  规格：0.5mg,1mg
  该抗原可应用于ELISA、胶体金、免疫亲和柱层析等免疫检测。
  蛋白载体:牛血清白蛋白/卵清白蛋白/匙孔血蓝蛋白BSA/OVA/KLH
  物理性状：液体，避免反复冻融
  来 源:Balb/c 小鼠
  免疫层析效价： 1:40以上，偶联比大于1:60
  蛋白浓度：＞1mg/ml，具体视批次而定
  缓冲液：0.01M PBS PH7.4无防腐剂
  储存条件：-20℃以下
  稳 定 性： 冻融一次复检合格，有效期3年
  本产品仅供研究使用，不适用于人类、治疗或诊断应用。