碱性橙-BSA(OVA）偶联抗原；碱性橙-BSA偶联抗原；碱

碱性橙-BSA(OVA）偶联抗原；碱性橙-BSA偶联抗原；碱性橙-OVA偶联抗原；碱性橙抗原

Basic Orange（BO/CSD）Alkaline Orange BSA (OVA) Coupled Antigen

碱性橙 - BSA（OVA）偶联抗原是将碱性橙与牛血清白蛋白（BSA）或卵清白蛋白（OVA）通过化学方法偶联形成的一种人工抗原，在免疫分析等领域有重要应用。
结构特点
碱性橙：又称盐基橙，是一种阳离子型染料，具有特定的分子结构和化学性质，其分子中的某些基团可通过化学反应与载体蛋白相连。但碱性橙本身免疫原性较弱，需要与载体蛋白偶联才能引发机体的免疫反应。
载体蛋白：BSA 和 OVA 是常用的载体蛋白。它们是具有高度免疫原性的大分子蛋白质，含有多个可与碱性橙结合的活性位点，如氨基、羧基等。通过与碱性橙偶联，载体蛋白能够将碱性橙的免疫原性传递给免疫系统，从而诱导机体产生针对碱性橙的特异性抗体。
制备方法
活化碱性橙：通常采用化学修饰的方法，使碱性橙分子带上可与蛋白质氨基或羧基反应的活性基团。例如，可以通过在碱性橙分子上引入羧基或醛基等活性基团，使其能够与载体蛋白发生偶联反应。
偶联反应：将活化后的碱性橙与 BSA 或 OVA 在适当的反应条件下混合反应。常用的偶联方法有碳二亚胺法、wu二醛法等。以碳二亚胺法为例，碳二亚胺作为缩合剂，能够促进碱性橙上的羧基与载体蛋白上的氨基发生缩合反应，形成稳定的酰胺键，从而实现碱性橙与载体蛋白的偶联。反应过程通常在缓冲溶液中进行，以维持合适的 pH 值和反应环境，确保偶联反应的顺利进行。
纯化与鉴定：偶联反应结束后，需要通过透析、凝胶过滤等方法去除未反应的碱性橙、碳二亚胺以及其他小分子杂质，得到纯化的碱性橙 - BSA（OVA）偶联抗原。然后采用紫外 - 可见光谱分析、SDS - 聚丙xi酰胺凝胶电泳等方法对偶联抗原进行鉴定，通过对比偶联前后的光谱特征和蛋白条带变化，确认偶联反应是否成功。
应用
免疫检测：作为免疫原用于免疫动物，制备针对碱性橙的多克隆抗体或单克隆抗体。这些抗体可用于建立各种免疫检测方法，如酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫层析等，用于检测食品、环境样品等中的碱性橙残留。例如，在食品检测中，可通过 ELISA 方法快速、灵敏地检测出食品中是否含有非法添加的碱性橙，保障食品安全。
免疫分析研究：在免疫分析研究中，碱性橙 - BSA（OVA）偶联抗原可用于研究碱性橙与抗体之间的相互作用机制，优化免疫检测条件，提高检测的特异性和灵敏度。同时，也可作为标准抗原，用于绘制标准曲线，对样品中的碱性橙进行定量分析。

偶联比

定义：偶联比是指在偶联抗原中，碱性橙分子与载体蛋白（BSA 或 OVA）的结合比例。通常用每分子载体蛋白上结合的碱性橙分子数来表示。

测定方法：常用的测定方法有紫外 - 可见分光光度法。由于碱性橙和载体蛋白在紫外 - 可见光区有不同的吸收峰，通过测定偶联前后特定波长下的吸光度变化，并结合已知浓度的标准品，可计算出偶联比。例如，先分别测定碱性橙和载体蛋白在各自特征波长下的吸光度，再测定偶联抗原在相应波长下的吸光度，通过公式计算出偶联比。

合适范围：一般来说，对于碱性橙 - BSA（OVA）偶联抗原，偶联比在 5 - 20 之间较为合适。如果偶联比过低，可能导致免疫原性不足，难以引发机体产生有效的免疫反应；而偶联比过高，则可能会影响抗原的空间结构，导致抗体识别位点被遮蔽，同样不利于抗体的产生。

偶联位点

载体蛋白上的位点：BSA 和 OVA 分子表面含有多个可用于偶联的活性基团，如氨基（-NH₂）、羧基（-COOH）、巯基（-SH）等。碱性橙通常通过与这些活性基团反应而实现偶联。以碳二亚胺法为例，碱性橙分子上的羧基在碳二亚胺的作用下与 BSA 或 OVA 分子上的氨基发生缩合反应，形成酰胺键，从而将碱性橙偶联到载体蛋白上。因此，BSA 或 OVA 分子上的氨基是常见的偶联位点。

碱性橙上的位点：碱性橙分子中可参与偶联反应的位点通常是其分子结构中的一些活性基团。例如，碱性橙分子中的氨基、羟基等基团，在经过适当的化学修饰后，可以与载体蛋白上的相应基团发生反应。具体的偶联位点会因碱性橙的具体结构和所采用的偶联方法而有所不同。该抗原可应用于ELISA、胶体金、免疫亲和柱层析等免疫检测。
蛋白载体:牛血清白蛋白/卵清白蛋白/匙孔血蓝蛋白BSA/OVA/KLH
物理性状：液体，避免反复冻融
来 源:Balb/c 小鼠
免疫层析效价： 1:40以上，偶联比大于1:60
蛋白浓度：＞1mg/ml，具体视批次而定
缓冲液：0.01M PBS PH7.4无防腐剂
储存条件：-20℃以下