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100 Rxns/100 Rxns × 5
| 规格: | 100 Rxns | 产品价格: | ¥2399.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 100 Rxns × 5 | 产品价格: | ¥10797.0 |
■ 制品内容 (Code No.: RR064A: 50 μl反应×100次)
| 2X One Step RT-PCR Buffer Ⅲ*1 | 840 μl × 3 支 |
| TaKaRa Ex Taq HS (5 U/ μl) | 100 μl |
| PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ*2 | 100 μl |
| RNase Free dH2O | 1.25 m l × 2 支 |
| ROX Reference Dye (50X)*3 | 100 μl |
| ROX Reference Dye II (50X)*3 | 100 μl |
| *1 内含dNTP Mixture,Mg2+等。 *2 内含RNase Inhibitor。 *3 用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye(50X),7500 Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye II(50X),Thermal Cycler Dice Real Time System和Smart Cycler System、LightCycler等Real Time PCR扩增仪不必使用。 | |
■ 制品说明
| 本制品是采用探针法进行Real Time One Step RT-PCR的专用试剂。使用本制品进行Real Time RT-PCR反应可在同一反应管内连续进行,操作简单,并能有效防止污染。本反应体系由于可以对扩增产物进行实时监测,大大提高了检测灵敏度,并省略了PCR反应后的电泳步骤,非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。 本制品中使用了适合于Real Time RT-PCR的反转录酶PrimeScript RTase和具有高扩增效率和高扩增特异性的TaKaRa Ex Taq HS,能进行稳定高效的Real Time One Step RT-PCR反应。 |
| ■ 保存 |
| -20℃。 |
| ■ 试剂盒特长 |
| 1. 通过Real Time One Step RT-PCR反应,可以快速、准确地对RNA病毒等微量RNA 进行分析。 2. PCR用DNA聚合酶使用了TaKaRa Ex Taq HS,可以进行Hot Start法PCR 反应,再与Takara特别开发的Buffer系统相结合,具有高扩增效率,高扩增灵敏度,高扩增特异性之特点。 3. One Step RT-PCR Buffer III是一种2X浓度的Premix Type试剂,操作简单,能有效避免污染。 |
| ■ 使用注意 |
| 1. 当同时需要进行数次Real Time One Step RT-PCR反应时,应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、各种酶等),然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。 2. 使用TaKaRa Ex Taq HS、PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。 3. 2X One Step RT-PCR Buffer Ⅲ 融解后如有不溶物请充分混合。配制Real Time One Step RT-PCR反应液时应避免强光照射。 4. 反应液的配制、分装请一定使用新的 (无污染的) 枪头、Microtube等,尽量避免污染。 5. 本制品只能使用特异性反转录引物,不能使用Random Primer 和Oligo dT Primer 等进行反转录反应。 |
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文献和实验analysis. For a comprehensive list of real-time thermal cyclers please see the weblink at the end of this article. Tools for Real-Time RT-PCR Ambion’s MessageSensor™ RT Kit includes an RNase H+ MMLV RT that clearly outperforms MMLV RT enzymes
,这样可以节约反转录的试剂,cDNA可以多次使用,可用于检测稀有基因是否表达、从极少量细胞中定量检测特定mRNA的表达水平。 3)特异性引物: 最特异的反转录方法是用含目标RNA的互补序列的寡核苷酸作为引物,若PCR反应用二种特异性引物,第一条链的合成可由与mRNA3'端最靠近的配对引物起始。用此类引物仅产生所需要的cDNA,导致更为特异的PCR扩增。 做 Real Time PCR时,用于SYBR Green I/Eva Green 法时的一对引物与一般PCR
Detection of Noroviruses of Genogroups I and II in Drinking Water by Real-Time One-Step RT-PCR
by using a real-time one-step reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Two detection formats, SYBR Green-based and probe-based, are described. Noroviruses of genogroups I and II are detected separately.
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