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Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit
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有效期1年
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
-20℃保存
50 T
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit |
11143ES50 |
50 T |
385.00 |
11143ES70 |
200 T |
1425.00 |
产品描述
Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit是以RNA为模板进行定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。本试剂盒以RNA为模板,使用基因特异性引物,利用耐热Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并以此为模板在UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase作用下,配合优化的缓冲体系能够特异灵敏的对RNA模板进行精确定量。同时Buffer中额外添加了有效抑制非特异性PCR扩增的组分和提高扩增能力的促进因子,使定量PCR结果可以在宽广范围内更加真实有效。
本试剂盒以Kit形式提供,2×Hifair® Ⅲ SG buffer包含优化的缓冲体系和dNTPs等,优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子,适用于SYBR Green标记的高特异性检测系统。此外,Hifair® UH Ⅲ Enzymes包含比例优化的Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase、RNase inhibitor及UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase等。
产品组分
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
|
11143ES50(50 T) |
11143ES70(200 T) |
||
11143-A |
2×Hifair® Ⅲ SG buffer |
500 μL |
4×500 μL |
11143-B |
Hifair® UH Ⅲ Enzymes |
50 μL |
200 μL |
11143-C |
Hieff® 50×High Rox |
50 μL |
200 μL |
11143-D |
Hieff® 50×Low Rox |
50 μL |
200 μL |
11143-E |
RNase-free ddH2O |
500 μL |
4×500 μL |
【注】: SG buffer为SYBR Green buffer的简写,UH为UNICON-Hifair的简写。
适用机型
High Rox适用机型: ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus;
Low Rox 适用机型: ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;
Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;
不需要Rox校正的仪器型号:
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler2.0, Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.
运输与保存方法
冰袋运输。
-20℃避光储存,有效期一年。本品避免反复冻融。建议分装保存。
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase-free耗材。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途!
反应体系(以20 μL为例)
组分 |
体积(μL) |
终浓度 |
2×Hifair® Ⅲ SG buffer |
10 |
1× |
Hifair® UH Ⅲ Enzymes |
1 |
- |
Hieff® 50×High Rox or Low Rox |
0.4 |
1× |
Forward Primer (10 μmol/L) |
0.4 |
0.2 μmol/La |
Reverse Primer (10 μmol/L) |
0.4 |
0.2 μmol/La |
模板 RNA |
Total RNA 1 pg-1 μg |
- |
RNase-free ddH2O |
to 20d |
- |
【注】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。
a. 引物浓度:通常引物终浓度为0.2 μmol/L,也可以根据情况在0.1-1.0 μmol/L之间进行调整。
b. 参比染料:Rox的添加,可根据不同仪器型号进行选择,具体可参考【适用机型】。
c. 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制CT值在20-30之间适宜。
d. 反应体系:推荐使用20 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e. 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
标准扩增程序
反应阶段 |
温度 |
时间 |
循环数 |
逆转录 |
42℃b |
10 mina |
1 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
扩增反应 |
95℃ |
10 sec |
40 |
60℃ |
30 sec |
||
熔解曲线d |
仪器默认设置 |
1 |
【注】:
a. 逆转录:对于一些极低丰度的基因可以将逆转录时间适当延长至15 min。
b. 温度:对于含复杂二级结构或高GC含量的RNA模板,可将逆转录温度提高到55℃,有助于提升灵敏度。
c. 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。
d. 熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。
HB220624
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