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PCR 引物设计小技巧，你 get 了吗？

1、引物最好在模板 cDNA 的保守区内设计 DNA 序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在 NCBI 上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2、引物长度一般在 15-30 碱基之间 引物长度（primer length）常用的是 18-27bp，但不应大于 38bp，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于 Taq DNA 聚合酶进行反应。 3、引物 GC 含量在 40%~60% 之间，Tm

如何做好 Southern 杂交？

内的，而酶只有在甘油浓度 具体操作如下：在 1.5 mL 离心管中依次加入DNA（1 μg/μl）20 μg10× 酶切 buffer 4.0 μl限制性内切酶（10 U/μl）5.0 μl加 ddH2O 至 500 μl在最适温度下消化 1-3 hr。消化结束时可取 5 μl 电泳检测消化效果。如果消化效果不好，可以延长消化时间，但超过 6 hr 已没有必要。或者放大反应体积，或者补充酶再消化。如仍不能奏效，可能的原因是 DNA 样品中有太多的杂质，或酶的活力下降。消化后的 DNA 加入 1/10

这几类 PCR 技术你知道吗？

。 若连接处的靶序列有点突变，引物不能与靶序列精确结合，缺口附近核苷酸的空间结构发生变化，连接反应不能进行，也就不能形成连接产物。 LCR 的引物是两对分别互补的引物，引物长度为 20～26 个，以保证引物与靶序列的特异性结合，LCR 识别点突变的特异性高于 PCR，其特异性首先取决于引物与模板的特异性结合，其次是耐热连接酶的特异性。LCR 连接反应温度接近寡苷酸的解链温度(Tm)，因而识别单核苷酸错配的特异性极高。 LCR 的扩增效率与 PCR 相当，用耐热连接酶做 LCR 只用两个温度循环，94℃