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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
PT67
- 库存:
咨询销售
- 组织来源:
小鼠
- 物种来源:
小鼠
- 运输方式:
顺丰发货
- 规格:
1×10⁶ cells/T25 培养瓶
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文献和实验问:构建逆转录病毒为载体的DNA(质粒),阳离子脂质体2000(过期的),转染病毒包装细胞pt67,G418筛选,在换液和传代过程中均会有细胞死亡(贴壁细胞漂浮)。求教原因。换液3.6ml DMEM+0.4ml新生牛血清+24μlG418传代用胰酶ph 7.2,1ml,用0.3ml新生牛血清中和,800rpm离心5min,弃上清,加入上述培养液。答:做一下G418浓度筛选,另外你的对照组未转染的细胞经同样浓度G418筛选后怎样呢?是否本来细胞状态不好?或是根本没有转进去呢?还有就是脂质
问:大家好,请问有人做过逆转录病毒包装吗,我最近在用PT67包装病毒,按照说明书上的要求,在细胞长到70%左右汇合时加入质粒和脂质体和无血清培养液培养4小时后更换为完全培养基继续培养24小时后加300μg/MLG418筛选,现在加药已经36个小时了,可是看细胞长的密密麻麻的大概有100%了吧,还不见细胞往下掉,我真是急死了,300μg/ml的筛选浓度是我在预实验里确定的应该错不了,可是为什么加药以后细胞还不死呢,说明书上说70%汇合时转染后还要继续培养24-36小时再加药,我知道这是要让抗性
tydyhan:我一直做细菌这块,对病毒操作不是很懂,请教大家:建立表达某基因的重组逆转录病毒载体的B16细胞系含某基因的重组逆转录病毒载体已获得,需转染PA 317包装细胞,通过G418筛选获得表达某基因的重组逆转录病毒。Polybrene进行转染B16细胞,筛选阳性转化克隆,获得稳定表达的B16细胞株。这里怎么具体进行操作??丁香园网友adychen认为:1、首先最好选择的是带EGFP逆转录病毒载体,方便以后的转染率和感染率的观察.2、重组载体;3、得出载体抗性基因的抗生素最佳细胞筛浓度
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