- ￥923 - 3462
- BioTNT
- A2010A006
- 上海
- 2025年07月15日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 供应商：
上海普时如生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100T/500T
| 规格： | 100T | 产品价格： | ￥923.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500T | 产品价格： | ￥3462.0 |
使 用 说 明 书
【规格】
QDpro One Step RT PCR Mix（1ml） 100T： 货号：A2010A006；QDpro One Step RT PCR Mix（5ml） 500T： 货号：A2010A006L；
【前言】
本产品提供了一个灵敏、高效、快速地扩增并检测RNA 的完整系统。One Step RT- PCR preMix包含所有 RT-PCR 所需的、并经优化的 Reaction Buffer、RT 酶混合物等，使用者只需加入适量的引物、探针和待检样品，即可进行 One Step RT- PCR 检测。本产品使用高效率 M-MLV 反转录酶和化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶，为 RT-PCR 反应提供了更高的产量及灵敏度、特异性。
采用的UNG/dUTP系统为PCR防污染系统；本产品使用的UNG酶常温即可起作用，不需要设置专门的反应温度。
本产品适用于开放型数字PCR仪，用户可参考推荐的扩增程序，根据实验结果自行摸索最佳扩增程序。
本产品适用于lncRNA，microRNA, RNA病毒检测进行一步法RT-qPCR 探针法实验。
试验前应准备好用于检测目的基因的引物、探针。引物、探针应用HPLC或PAGE纯化。
本产品可用于多重荧光探针法的qPCR检测。
【用户需要准备的其他物品】
1. 实验用水：使用DEPC处理的PCR用纯水。2. 待检样品：总RNA，mRNA，或者其他RNA；
3. RNase free & DNase free 的tip头，离心管,薄壁PCR管等；
4. 各种规格的移液器；
5. Real time PCR仪：本产品适用于下列Real time PCR仪：ABI PRISM®7700、7500、7300、7000、Q3，Q5，Q7， BIORAD iCycler 、Roch Light Cycler 480 等Real time PCR仪上使用，具体使用方法请参照相应仪器的说明书。
【反应液配制】
| 反应液组份 | 加量 (μl) | 终浓度 | 备注 |
| QD RT - PCR mix | 10 | 1X | |
| 上游引物（25uM) | 0.3 | 0.3uM | 用户自备 |
| 下游引物（25uM) | 0.3 | 0.3uM | 用户自备 |
| 探针（25uM) | 0.15 | 0.15uM | 用户自备 |
| 待检样品 | 5-9 | 10pg~100ng | 用户自备 |
| DEPC H2O | 补足 | 用户自备 | |
| 总体积 | 20ul |
2.引物、探针、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整，同时增减 DEPC 水用量，保证总反应体积不变即可。
3. 系统中不含oligo dT和随机引物，检测microRNA 请自行添加茎环引物；DEPC 水调整体积。
【RT-PCR 扩增检测】
1 将反应管放入荧光 PCR 扩增仪进行扩增检测。2 循环参数设定（请参照各类仪器的操作说明进行设置）
| 步骤 | 温度（℃） | 时间 | 循环数（次） | |
| 1 | 逆转录反应 | 50 | 5-15分钟 | 1 |
| 2 | 反转录酶灭活及解链 | 95 | 5 分钟 | 1 |
| 3 | 变性 | 95 | 5 秒 | 40-45 |
| 4 | 退火、延伸及检测荧光 | 60 | 30秒 | |
| 步骤 4 中 60℃时荧光检测，检测通道：FAM/HEX/VIC/ROX/CY5 | ||||
【保存条件】
本产品原则上在-20℃以下冷冻保存，避免反复冻融。如果在短期内需持续使用时， 融解后可在4℃保存，最长可保存1周。【注意事项】
1. 本产品为研究用试剂。请勿作为诊断、临床试剂用。2. 为保证实验结果的准确性和可靠性，请注意以下事项：
1) 实验室应严格分区，避免 PCR 产物污染。2) 各组分使用前 2-8℃解冻，室温平衡十五分钟；
3) 实验全过程严防 RNA 酶污染及 RNA 降解；使用已校准的移液器，选用进口一次性使用的 PCR 反应管、离心管、tip 头等进行样本处理及配液等操作，所有用具应不含DNA 酶和RNA 酶。实验样品尽可能新鲜，提取过程应严防RNA 酶污染及操作不当导致的RNA 降解。
4) 斜体字部分时间和温度很重要，不得更改；
5) 根据具体实验结果，建议引物浓度在 0.1-1uM 之间调整，探针浓度在 0.05-1uM 之间调整；
6) 建议使用 10 pg～100 ng 的 Total RNA 为模板；
7) 反转录时间可以根据模板具体情况进行调节，建议不要低于 5分钟；
8) 60 度是荧光定量 PCR 常用的退火温度，需要根据引物、探针设计的具体情况来确定，如退火温度低于 58 度，建议采用三步法扩增 40-45 个循环；延伸时间可根据使用仪器所需要的数据采集最短时间限制自行调整。
9) 本产品使用的 UNG 酶常温即可起作用，不需要设置专门的反应温度。
10) 本产品适用于开放型数字PCR仪，用户可参考推荐的扩增程序，根据实验结果自行摸索最佳扩增程序。
11) 本产品-15~-20℃保存 18 个月，2-8℃保存 1 周产品性能不受影响。
12) 引物、探针设计过程中应尽可能避免发夹结构、二聚体等现象的发生，探针的位置尽可能靠近上游引物, PCR目标片段最好小于200bp，尽可能在150bp以内。
13) 统一配液后分装以减少加样误差，每次实验应设置阴性对照。
14) 禁止标记PCR 反应管，避免外源性荧光信号干扰。
15) PCR 反应管中不能有气泡，否则会产生非特异的荧光信号。若有气泡，可先用手指将气泡弹破，然后再低速离心消除。
16) 实时荧光PCR 仪器连续进行实验时，最好间隔一小时以上再使用。实时荧光PCR 仪需经常校正和清洁载样板板孔。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验随机引物 适用于长的或具有发卡结构的 RNA。适用于 rRNA、mRNA、tRNA 等所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。 Oligo dT 适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA。（原核生物的 RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具PolyA 尾 巴。）由于 Oligo dT 要结合到 PolyA 尾巴上，所以对 RNA 样品的质量要求较高，即使有少量降解也 会使全长 cDNA 合成量大大减少。 基因特异性引物 与模板序列互补
This protocol uses C. therm. Polymerase One-Step RT-PCR system from Roche. 1. Setup master mix 1: 25 mM dNTP 0.8 m l DMSO
SuperScriptⅡ的逆转录反应中加入乙酰化BSA可以增加灵敏度（图8），而且对于小量RNA，减少SuperScriptⅡ的量并加入40单位的RnaseOut核酸酶抑制剂可以提高检测的水平。如果在RNA分离过程中使用了糖元，仍然建议在使用SuperScriptⅡ进行逆转录反应时加入BSA或RNase抑制剂。 图9 一步法RT-PCR的灵敏度 使用SuperScriptⅡOne-Step RT-PCR System从0，0.1，1，10，102，103pg Hela
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
