• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        RT-PCR --- one-step

        互联网

        1223
         

        This protocol uses C. therm. Polymerase One-Step RT-PCR system from Roche.

        1. Setup master mix 1:

         

        <center> <table> <tbody> <tr> <td> <font><font><font>25 mM dNTP</font> </font></font></td> <td> <font><font><font>0.8 <font>m</font> l</font> </font></font></td> </tr> <tr> <td> <font><font><font>DMSO</font> </font></font></td> <td> <font><font><font>2.5 <font>m</font> l</font> </font></font></td> </tr> <tr> <td> <font><font><font>100 mM DTT</font> </font></font></td> <td> <font><font><font>2.5 <font>m</font> l</font> </font></font></td> </tr> <tr> <td> <font><font><font>RNase Inhibitor (40 U/<font>m</font> l)</font> </font></font></td> <td> <font><font><font>0.5 <font>m</font> l</font> </font></font></td> </tr> <tr> <td> <font><font><font>forward primer (10-20 <font>m</font> M)</font> </font></font></td> <td> <font><font><font>1 <font>m</font> l</font> </font></font></td> </tr> <tr> <td> <font><font><font>reverse primer (10-20 <font>m</font> M)</font> </font></font></td> <td> <font><font><font>1 <font>m</font> l</font> </font></font></td> </tr> <tr> <td> <font><font><font>template RNA (50 pg-1 <font>m</font> g)</font> </font></font></td> <td> <font><font><font>1 <font>m</font> l</font> </font></font></td> </tr> <tr> <td> <font><font><font>nucelase-free ddH<sub><small>2</small> </sub> O</font> </font></font></td> <td> <font><font><font>15.7 <font>m</font> l</font> </font></font></td> </tr> </tbody> </table> </center>

        2. Setup master mix 2:

         

        <center> <table> <tbody> <tr> <td> <font><font><font><font>5X RT-PCR buffer</font> </font></font></font></td> <td> <font><font><font><font>10 <font>m</font> l</font> </font></font></font></td> </tr> <tr> <td> <font><font><font><font><em>C. therm.</em> polymerase mixture</font> </font></font></font></td> <td> <font><font><font><font>2 <font>m</font> l</font> </font></font></font></td> </tr> <tr> <td> <font><font><font><font>nucelase-free ddH<sub><small>2</small> </sub> O</font> </font></font></font></td> <td> <font><font><font><font>13 <font>m</font> l</font> </font></font></font></td> </tr> </tbody> </table> </center>

        3. Mix 25 m l master mix 1 and 25 m l master mix 2.

        4. Overlay with mineral oil if required.

        5. Program the thermocycler such that the first cycle is for RT reaction at 60-72 for 30 minutes.

        6. Follow by PCR reaction cycles.

        7. Analyze the samples on a 1-2% agarose gel.

        <center> <p>  </p> </center>
        上一篇:Detecting DNA Contamination in RT-PC   下一篇:Gene-specific RT-PCR
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序