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文献和实验的重组蛋白。相对于天然蛋白来说,重组蛋白比较容易获得得较高的纯度,而且鉴定也比较方便,整个生产过程更容易掌握。相信大家都做过重组蛋白,所以关于纯化我就不多说了,值得注意的是重组蛋白为了纯化的方便,通常需要带一段标签(如GST、6*His、Myc、MBP、Flag、Fc等),在免疫中动物体通常会产生这些标签的抗体,在后面的纯化过程中需要去掉这些标签的抗体,比如说可以使用对应的另一种标签的重组蛋白纯化抗体,或者先用纯标签蛋白吸附掉血清中的标签抗体,然后再用重组蛋白纯化目的抗体。6*His这个标签比较
③虽然经过多年努力,哺乳动物细胞表达系统的表达水平有大幅度增高,但从整个水平上看仍偏低,一般处在杂交瘤细胞单克隆抗体蛋白产率的下限,即1-30μg/l08细胞/24小时。有人认为其限速步骤可嚣是在工程细胞中(对于重组蛋白来讲,常是异源的),重组蛋白的分泌效率较低。 1 表达载体 1.1 表达栽体的类型 哺乳动物细胞表达外源重组蛋白可利用质粒转染和病毒载体的感染。利用质粒转染获得稳定的转染细胞需几周甚至几个月时间,而利用病毒表达系统则可快速感染细胞,在几天内使外源
隆抗体蛋白产率的下限,即1-30μg/l08细胞/24小时。有人认为其限速步骤可嚣是在工程细胞中(对于重组蛋白来讲,常是异源的),重组蛋白的分泌效率较低。1、表达载体(1)表达栽体的类型哺乳动物细胞表达外源重组蛋白可利用质粒转染和病毒载体的感染。利用质粒转染获得稳定的转染细胞需几周甚至几个月时间,而利用病毒表达系统则可快速感染细胞,在几天内使外源基因整合到病毒载体中,尤其适用于从大量表达产物中检测出目的蛋白。根据进入宿主细胞的方式,可将表达载体分为病毒载体与质粒载体。病毒载体是以病毒颗粒的方式,通过病毒
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